| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 猪伪狂犬病研究进展 | 第11-22页 |
| 1.1 猪伪狂犬病的概述 | 第11-17页 |
| 1.1.1 猪伪狂犬病简介 | 第11页 |
| 1.1.2 猪伪狂犬病毒简介 | 第11-13页 |
| 1.1.3 PRV的主要蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.4 PRV的传播方式与感染途径 | 第14页 |
| 1.1.5 猪伪狂犬病的预防 | 第14页 |
| 1.1.6 新型疫苗研制现状 | 第14-15页 |
| 1.1.7 猪伪狂犬病的诊断方法 | 第15-17页 |
| 1.2 纳米抗体研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 纳米抗体的特点 | 第18-19页 |
| 1.2.3 纳米抗体的主要应用 | 第19-20页 |
| 1.2.4 纳米抗体分离方法 | 第20-21页 |
| 1.2.5 噬菌体展示技术简介 | 第21页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪伪狂犬病毒gE重组蛋白的表达与纯化 | 第22-29页 |
| 2.1 材料与仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂耗材 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 gE重组蛋白的诱导表达与可溶性分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 gE重组蛋白表达条件的优化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE检测重组gE蛋白纯化与表达情况 | 第24页 |
| 2.2.4 重组gE蛋白的Western-blot鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 纯化后重组gE蛋白的浓度测定 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-28页 |
| 2.3.1 gE重组蛋白可溶性表达温度的确定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 gE重组蛋白诱导IPTG浓度的确定 | 第26页 |
| 2.3.3 gE重组蛋白诱导时间的确定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 gE蛋白的纯化与Western-blot鉴定 | 第27页 |
| 2.3.5 gE蛋白纯化后浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 gE蛋白特异性纳米抗体的淘选与鉴定 | 第29-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 菌株、质粒与实验动物 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂与材料 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 免疫双峰驼 | 第30页 |
| 3.2.2 构建VHH噬菌体抗体文库 | 第30-32页 |
| 3.2.3 构建VHH噬菌体展示载体 | 第32-33页 |
| 3.2.4 TG1感受态细胞的制备及电转化连接产物 | 第33-34页 |
| 3.2.5 鉴定文库的多样性与库容量 | 第34页 |
| 3.3 淘选针对gE蛋白的特异性纳米抗体 | 第34-38页 |
| 3.3.1 辅助噬菌体的制备 | 第34-35页 |
| 3.3.2 VHH噬菌体抗体文库的救援 | 第35页 |
| 3.3.3 平板菌落计数后,计算其滴度。 | 第35页 |
| 3.3.4 gE蛋白特异性重组噬菌体的淘选 | 第35-37页 |
| 3.3.5 测序分析针对gE蛋白的特异性纳米抗体 | 第37-38页 |
| 3.3.6 鉴定gE蛋白的重组纳米抗体的特异性 | 第38页 |
| 3.4 实验结果 | 第38-42页 |
| 3.4.1 双峰驼的免疫 | 第38页 |
| 3.4.2 VHH噬菌体抗体文库的构建 | 第38-39页 |
| 3.4.3 gE重组蛋白特异性纳米抗体的淘选 | 第39-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 3.6 小结 | 第43-44页 |
| 全文总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-56页 |
| 缩略词 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
