| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-20页 |
| 第一章 猪瘟病毒和重链铁蛋白研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1 猪瘟病毒研究进展 | 第12页 |
| 1.2 CSFV基因组及其编码蛋白在病毒感染及增殖过程中的作用 | 第12-16页 |
| 1.2.1 CSFV囊膜蛋白介导病毒粒子的吸附和入侵 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CSFV基因组非编码区以及非结构蛋白对CSFV增殖的调控 | 第13-14页 |
| 1.2.3 宿主细胞内成分调控CSFV的增殖 | 第14-15页 |
| 1.2.4 CSFV逃逸宿主天然免疫 | 第15页 |
| 1.2.5 宿主细胞内成分对病毒毒力的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.6 CSFV感染对宿主细胞凋亡和细胞周期的影响 | 第16页 |
| 1.3 重链铁蛋白(FHC)研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 真核生物体内铁蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 真核生物铁蛋白的化学性质 | 第17-18页 |
| 1.3.3 真核生物体内铁蛋白的平衡以及降解 | 第18页 |
| 1.3.4 哺乳动物体内对铁蛋白表达的调控 | 第18-19页 |
| 1.3.5 哺乳动物体内铁蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 试验研究 | 第20-51页 |
| 第二章 FHC与CSFVNS4B蛋白相互作用的研究 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株、病毒、细胞和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂、试剂盒与抗体 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第21-23页 |
| 2.2.1.1 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 目的基因的扩增与纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 目的基因的连接转化与阳性菌落筛选 | 第23页 |
| 2.2.1.4 质粒提取与鉴定 | 第23页 |
| 2.2.2 原核重组质粒的表达结果验证 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 原核重组质粒的转化与样品制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 Westernblot检测目的蛋白 | 第24页 |
| 2.2.3 真核重组质粒的转染与表达结果验证 | 第24页 |
| 2.2.3.1 质粒转染与蛋白样品制备 | 第24页 |
| 2.2.3.2 Westernblot检测目的蛋白 | 第24页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀验证FHC与NS4B的相互作用 | 第24-25页 |
| 2.2.5 GSTpull-down验证FHC与NS4B的相互作用 | 第25页 |
| 2.2.6 激光共聚焦验证FHC与NS4B的相互作用 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 载体鉴定 | 第25-27页 |
| 2.3.2 原核重组质粒表达结果鉴定 | 第27页 |
| 2.3.3 真核重组质粒表达结果验证 | 第27-28页 |
| 2.3.4 Co-IP验证FHC与NS4B的相互作用 | 第28-29页 |
| 2.3.5 GSTpull-down验证FHC与NS4B的相互作用 | 第29-30页 |
| 2.3.6 激光共聚焦验证FHC与NS4B的相互作用 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 FHC对猪瘟病毒增殖的影响 | 第33-51页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 菌株、病毒、细胞和质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂、试剂盒与抗体 | 第33页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 FHC过表达与shRNA慢病毒干扰载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.2 重组慢病毒包装及其滴度测定 | 第34-35页 |
| 3.2.3 FHC过表达细胞系与FHC稳定低表达细胞系的建立 | 第35页 |
| 3.2.4 MTT试验检测慢病毒介导FHC过表达以及稳定低表达对细胞活力的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.5 实时荧光定量RCR检测FHC的mRNA水平 | 第36页 |
| 3.2.6 Westernblot检测FHC的蛋白表达水平 | 第36-37页 |
| 3.2.7 FHC过表达以及FHC稳定低表达对CSFV增殖的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.7.1 RT-qPCR检测CSFV增殖情况 | 第37页 |
| 3.2.7.2 Westernblot检测CSFV增殖情况 | 第37页 |
| 3.2.7.3 间接免疫荧光检测CSFV增殖情况 | 第37-38页 |
| 3.2.8 外源NS4B蛋白表达以及CSFV感染对FHC表达水平的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.8.1 外源表达CSFVNS4B对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第38页 |
| 3.2.8.2 CSFV感染对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.8.3 不同滴度CSFV感染对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第39页 |
| 3.2.9 FHC在CSFV感染过程中对细胞凋亡水平的影响 | 第39页 |
| 3.2.10 FHC在CSFV感染过程中对细胞内ROS水平的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.11 数据统计分析 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-48页 |
| 3.3.1 shRNA慢病毒干扰载体的鉴定 | 第40页 |
| 3.3.2 重组慢病毒滴度测定 | 第40页 |
| 3.3.3 FHC稳定过表达以及FHC稳定低表达细胞系的建立 | 第40-42页 |
| 3.3.4 MTT法检测慢病毒介导FHC过表达以及稳定低表达对细胞活力的影响 | 第42页 |
| 3.3.5 FHC稳定过表达细胞系以及FHC稳定低表达细胞系FHC表达水平鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.6 FHC过表达对CSFV增殖的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.7 FHC稳定低表达对CSFV增殖的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.8 外源NS4B蛋白表达以及CSFV感染对FHC表达水平的影响 | 第45-47页 |
| 3.3.8.1 外源表达CSFVNS4B对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第45页 |
| 3.3.8.2 CSFV感染对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.8.3 不同滴度CSFV感染对PK-15细胞中FHC表达水平的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.9 FHC在CSFV感染过程中对细胞凋亡水平的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.10 FHC在CSFV感染过程中对细胞内ROS水平的影响 | 第48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
