| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 目录 | 第14-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-37页 |
| 1.1 植物次生代谢产物 | 第21-23页 |
| 1.1.1 植物次生代谢产物及种类 | 第21页 |
| 1.1.2 植物次生代谢产物的作用 | 第21-22页 |
| 1.1.3 提高植物次生代谢产物含量的策略 | 第22-23页 |
| 1.2 长春花次生代谢产物及生物合成途径 | 第23-27页 |
| 1.2.1 长春花次生代谢产物 | 第23-24页 |
| 1.2.2 长春花次生代谢产物合成途径 | 第24-27页 |
| 1.3 提高长春花萜类吲哚生物碱的策略 | 第27-29页 |
| 1.3.1 单基因转化策略 | 第27页 |
| 1.3.2 双基因转化策略 | 第27-28页 |
| 1.3.3 转录调控因子转化策略 | 第28页 |
| 1.3.4 染色体加倍策略 | 第28-29页 |
| 1.3.5 植物生长调节剂处理策略 | 第29页 |
| 1.4 茉莉酸类物质生物合成途径及其作为诱导子的应用 | 第29-32页 |
| 1.4.1 茉莉酸及其衍生物 | 第29-30页 |
| 1.4.2 茉莉酸类物质的生物合成途径 | 第30-31页 |
| 1.4.3 茉莉酸类物质作为诱导子的应用 | 第31-32页 |
| 1.5 茉莉酸生物合成途径关键酶基因及在次生代谢工程中的应用 | 第32-35页 |
| 1.5.1 α-亚麻酸上游的酶 | 第32-33页 |
| 1.5.2 脂氧合酶（1ipoxygenase，LOX） | 第33页 |
| 1.5.3 丙二烯氧化物合酶（allene oxide synthase，AOS） | 第33-34页 |
| 1.5.4 丙二烯氧化物环化酶（allene oxide cyclase，AOC） | 第34页 |
| 1.5.5 OPDA 还原酶（OPDA reductase，OPR3） | 第34-35页 |
| 1.5.6 β-氧化酶 | 第35页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 第二章 长春花丙二烯氧化物合酶基因的克隆与表达分析 | 第37-68页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第38页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.2.2 菌株 | 第38页 |
| 2.2.3 质粒载体 | 第38页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第38-53页 |
| 2.3.1 长春花叶片总 RNA 的提取 | 第38-40页 |
| 2.3.2 长春花基因组 DNA 的小量提取与凝胶电泳检测 | 第40页 |
| 2.3.3 长春花丙二烯氧化物合酶 CrAOS 基因核心片段的克隆 | 第40-42页 |
| 2.3.4 RACE 技术扩增长春花 CrAOS 基因 cDNA 全长 | 第42-47页 |
| 2.3.5 长春花 CrAOS 基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 2.3.6 长春花中 CrAOS 基因的拷贝数分析 | 第48-52页 |
| 2.3.7 长春花 CrAOS 基因的表达分析 | 第52-53页 |
| 2.4 结果与分析 | 第53-66页 |
| 2.4.1 CrAOS 核心片段、3′ RACE 和 5′ RACE 的克隆 | 第53-54页 |
| 2.4.2 CrAOS 基因全长的克隆及序列分析 | 第54-55页 |
| 2.4.3 CrAOS 基因的生物信息学分析 | 第55-59页 |
| 2.4.4 CrAOS 基因在长春花基因组中的拷贝数 | 第59-60页 |
| 2.4.5 CrAOS 基因在长春花不同组织的表达 | 第60-62页 |
| 2.4.6 CrAOS 基因在不同处理下的表达分析 | 第62-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66页 |
| 2.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 第三章 长春花丙二烯氧化物环化酶基因克隆及表达分析 | 第68-92页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第68页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第68-74页 |
| 3.3.1 长春花叶片总 RNA 的提取分离与质量检测 | 第68页 |
| 3.3.2 长春花基因组 DNA 的小量提取与凝胶电泳检测 | 第68-69页 |
| 3.3.3 长春花 CrAOC 基因核心片段的克隆 | 第69-70页 |
| 3.3.4 RACE 技术扩增长春花 CrAOC 基因 | 第70页 |
| 3.3.5 长春花 CrAOC 基因全长的扩增 | 第70-72页 |
| 3.3.6 长春花 CrAOC 基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第72页 |
| 3.3.7 长春花 CrAOC 基因拷贝数分析 | 第72-73页 |
| 3.3.8 CrAOC 基因的表达分析 | 第73页 |
| 3.3.9 HPLC 法测定长春花中 TIAs 的含量 | 第73-74页 |
| 3.4 结果与分析 | 第74-90页 |
| 3.4.1 CrAOC 核心片段、3′端和 5′端的克隆 | 第74页 |
| 3.4.2 CrAOC 基因全长的克隆及序列分析 | 第74-77页 |
| 3.4.3 CrAOC 基因序列及编码蛋白的生物信息学分析 | 第77-80页 |
| 3.4.4 CrAOC 基因在长春花基因组中的拷贝数 | 第80-81页 |
| 3.4.5 CrAOC 基因在长春花不同组织的表达分析 | 第81-82页 |
| 3.4.6 CrAOC 基因在不同处理条件下的表达 | 第82-86页 |
| 3.4.7 HPLC 法测定长春花中 TIAs 的含量 | 第86-90页 |
| 3.5 讨论 | 第90-91页 |
| 3.6 本章小结 | 第91-92页 |
| 第四章 长春花 CrAOC 基因转化烟草 | 第92-111页 |
| 4.1 前言 | 第92-93页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第93-94页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第93页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第93页 |
| 4.2.3 菌株 | 第93页 |
| 4.2.4 常用质粒载体 | 第93页 |
| 4.2.5 酶与试剂盒 | 第93页 |
| 4.2.6 烟草转化培养基的配制 | 第93-94页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第94-103页 |
| 4.3.1 CrAOC 基因片段的扩增 | 第94页 |
| 4.3.2 目的片段纯化回收 | 第94-95页 |
| 4.3.3 目的片段的连接 | 第95页 |
| 4.3.4 大肠杆菌（DH5α）感受态细胞的制备和连接反应物的转化 | 第95页 |
| 4.3.5 大肠杆菌质粒的小量提取 | 第95页 |
| 4.3.6 植物表达载体的构建 | 第95-99页 |
| 4.3.7 植物表达载体转化根癌农杆菌 EHA105 | 第99-100页 |
| 4.3.8 农杆菌介导 pCAMBIA1304-AOC 对烟草遗传转化 | 第100-101页 |
| 4.3.9 转基因烟草的 PCR 分析 | 第101-102页 |
| 4.3.10 转基因烟草中尼古丁含量的检测 | 第102-103页 |
| 4.4 结果分析 | 第103-109页 |
| 4.4.1 长春花 CrAOC 全长的扩增 | 第103-104页 |
| 4.4.2 植物表达载体的构建 | 第104-105页 |
| 4.4.3 烟草遗传转化 | 第105-106页 |
| 4.4.4 转基因烟草的 PCR 验证 | 第106-107页 |
| 4.4.5 转基因烟草中尼古丁含量的测定 | 第107-109页 |
| 4.5 讨论 | 第109-110页 |
| 4.6 本章小结 | 第110-111页 |
| 第五章 结论与展望 | 第111-113页 |
| 5.1 总结 | 第111-112页 |
| 5.2 本研究创新点 | 第112页 |
| 5.3 展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-124页 |
| 附录 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第128页 |
