| 摘要 | 第3-8页 |
| abstract | 第8-13页 |
| 中英文缩略词表 | 第17-19页 |
| 第1章 前言 | 第19-25页 |
| 1.1 先天性心脏病概述 | 第19页 |
| 1.2 心脏发育过程的简述 | 第19-21页 |
| 1.3 EVC基因及其在Hedgehog(Hh)信号通路中的作用 | 第21-22页 |
| 1.4 Hh信号通路与细胞增殖 | 第22-23页 |
| 1.5 Hh信号通路与细胞凋亡 | 第23页 |
| 1.6 Hh信号通路参与SHF的发育 | 第23-25页 |
| 第2章 VSD患者的EVC基因遗传分析 | 第25-52页 |
| 材料与方法 | 第25-37页 |
| 1 研究对象 | 第25页 |
| 1.1 实验组 | 第25页 |
| 1.2 对照组 | 第25页 |
| 1.3 医学伦理 | 第25页 |
| 2 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 3 主要试剂及其配制 | 第26-28页 |
| 3.1 主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.2 主要试剂配制 | 第27-28页 |
| 4 实验方法与步骤 | 第28-37页 |
| 4.1 全血基因组DNA提取 | 第28-29页 |
| 4.2 DNA浓度测定 | 第29页 |
| 4.3 EVC基因DNA直接测序 | 第29-36页 |
| 4.4 统计学分析 | 第36页 |
| 4.5 EVC基因变异功能预测 | 第36-37页 |
| 结果 | 第37-49页 |
| 1 PCR产物电泳图 | 第37页 |
| 2 测序结果分析 | 第37-49页 |
| 2.1 通过对EVC基因的测序筛查,检测到已知的多态性位点11个 | 第37-44页 |
| 2.2 检测到EVC基因的杂合错义突变c.343C>G(p.L115V) | 第44-46页 |
| 2.3 基因变异位点在VSD组和对照组中的基因型和等位基因频率分布 | 第46-49页 |
| 2.4 EVC基因变异位点的功能预测结果 | 第49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 第3章 EVC基因L115V突变参与VSD的致病机制探讨 | 第52-85页 |
| 材料与方法 | 第52-72页 |
| 1 实验材料 | 第52页 |
| 2 主要实验设备及仪器 | 第52-54页 |
| 3 主要试剂及其配制 | 第54-59页 |
| 3.1 主要试剂 | 第54-55页 |
| 3.2 主要试剂配制 | 第55-59页 |
| 4 实验方法 | 第59-72页 |
| 4.1 实验分组 | 第59页 |
| 4.2 细胞培养 | 第59-62页 |
| 4.3 腺病毒感染 | 第62页 |
| 4.4 质粒瞬时转染 | 第62-63页 |
| 4.5 细胞总RNA提取 | 第63-64页 |
| 4.6 RNA逆转录 | 第64页 |
| 4.7 qRT-PCR | 第64-66页 |
| 4.8 蛋白质提取及蛋白免疫印迹(WesternBlot) | 第66-68页 |
| 4.9 细胞免疫荧光 | 第68-69页 |
| 4.10 细胞免疫共沉淀 | 第69页 |
| 4.11 EdU 细胞增殖检测（R11053.4，中国锐博公司） | 第69-70页 |
| 4.12 双荧光素酶报告基因活性检测（E1910，promega） | 第70-71页 |
| 4.13 TUNEL（C1092，中国碧云天公司） | 第71-72页 |
| 5 统计学分析 | 第72页 |
| 结果 | 第72-80页 |
| 1 SAG作用时间及EVC腺病毒载体的感染 | 第72-73页 |
| 2 EVC-L115V抑制NIH3T3细胞增殖 | 第73-75页 |
| 3 EVC-L115V促进NIH3T3细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 4 EVC-L115V降低HEDGEHOG信号通路活性 | 第76-80页 |
| 4.1 EVC-L115V突变对Hh通路下游转录因子Gli1、Gli2、Foxf1a蛋白表达的影响 | 第77-79页 |
| 4.2 EVC-L115V突变降低Gli1的转录激活能力 | 第79页 |
| 4.3 EVC-L115V突变后与Smo蛋白结合明显减少 | 第79-80页 |
| 讨论 | 第80-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 全文总结 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第93-94页 |
| 综述 | 第94-100页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
