| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1 柠檬酸 | 第12-20页 |
| 1.1 柠檬酸的性质及主要应用 | 第12-13页 |
| 1.2 柠檬酸的工业生产 | 第13页 |
| 1.3 柠檬酸生产菌株 | 第13-18页 |
| 1.4 柠檬酸的生物合成途径 | 第18-20页 |
| 2 丙酮酸羧化酶 | 第20-30页 |
| 2.1 丙酮酸羧化酶的性质及功能 | 第20页 |
| 2.2 丙酮酸羧化酶的结构特征 | 第20-21页 |
| 2.3 丙酮酸羧化酶的作用机制 | 第21-22页 |
| 2.4 丙酮酸羧化酶在有机酸代谢中的作用 | 第22-30页 |
| 3 论文立项依据和研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 pINA1312质粒的改造 | 第32-38页 |
| 1 前言 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1 质粒和菌株 | 第32页 |
| 2.2 培养基与试剂 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-37页 |
| 4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 P.guilliermondii丙酮酸羧化酶基因在Y.lipolitica表达和柠檬酸的小规模生产 | 第38-57页 |
| 1 前言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-46页 |
| 2.1 质粒和菌株 | 第38-39页 |
| 2.2 培养基与试剂 | 第39-40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-55页 |
| 3.1 基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.2 P.guilliermondii丙酮酸羧化酶基因表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.3 转化Y.lipolytica酵母细胞 | 第48-49页 |
| 3.4 转化子筛选验证 | 第49-51页 |
| 3.5 丙酮酸羧化酶酶活及基因表达水平 | 第51-52页 |
| 3.6 葡萄糖浓度的优化 | 第52-53页 |
| 3.7 补料分批发酵培养 | 第53-54页 |
| 3.8 发酵产物检测 | 第54-55页 |
| 4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 P.rubens丙酮酸羧化酶的基因克隆及生物信息学分析 | 第57-70页 |
| 1 前言 | 第57-58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-62页 |
| 2.1 质粒和菌株 | 第58页 |
| 2.2 培养基与试剂 | 第58页 |
| 2.3 实验方法 | 第58-62页 |
| 3 结果与讨论 | 第62-69页 |
| 3.1 基因组DNA的提取 | 第62-63页 |
| 3.2 简并引物PCR扩增 | 第63页 |
| 3.3 基因组步移技术获得丙酮酸羧化酶基因全长 | 第63-64页 |
| 3.4 丙酮酸羧化酶基因蛋白序列生物信息学分析 | 第64-69页 |
| 4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 P.rubens丙酮酸羧化酶基因在Y.lipolitica中表达和柠檬酸的小规模生产 | 第70-84页 |
| 1 前言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-75页 |
| 2.1 质粒和菌株 | 第70-71页 |
| 2.2 培养基与试剂 | 第71页 |
| 2.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 3 结果与讨论 | 第75-83页 |
| 3.1 P.rubens丙酮酸羧化酶基因表达质粒的构建 | 第75-77页 |
| 3.2 转化Y.lipolytica酵母细胞 | 第77-78页 |
| 3.3 转化子筛选验证 | 第78-79页 |
| 3.4 丙酮酸羧化酶比酶活及基因表达水平 | 第79-81页 |
| 3.5 葡萄糖浓度的优化 | 第81-82页 |
| 3.6 补料分批发酵培养 | 第82-83页 |
| 4 本章小结 | 第83-84页 |
| 论文总结与创新点 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 附录 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简历及发表的学术论文 | 第100页 |
