| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 R-扁桃酸简介 | 第12-13页 |
| 1.2 R-扁桃酸的制备 | 第13-17页 |
| 1.2.1 化学法生产R-扁桃酸 | 第13-14页 |
| 1.2.2 生物法合成R-扁桃酸 | 第14-16页 |
| 1.2.3 腈水解酶法制备R-扁桃酸 | 第16-17页 |
| 1.3 基因工程菌的建立 | 第17页 |
| 1.4 基因工程菌高密度发酵(HCDC)培养 | 第17-21页 |
| 1.4.1 发酵培养基的优化设计 | 第18页 |
| 1.4.2 发酵方式的选择 | 第18-19页 |
| 1.4.3 溶氧的控制 | 第19页 |
| 1.4.4 pH控制 | 第19页 |
| 1.4.5 温度控制 | 第19-20页 |
| 1.4.6 比生长速率(μ)的控制 | 第20页 |
| 1.4.7 乙酸的控制 | 第20-21页 |
| 1.4.8 二氧化碳的控制 | 第21页 |
| 1.4.9 泡沫的控制 | 第21页 |
| 1.5 小结 | 第21页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二章 重组大肠杆菌发酵产腈水解酶条件优化 | 第28-52页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 菌种与培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要仪器和试剂 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 菌种培养方法 | 第29页 |
| 2.3.2 菌体催化转化方法 | 第29-30页 |
| 2.3.3 分析测试方法 | 第30-31页 |
| 2.3.4 摇瓶发酵培养条件优化 | 第31-33页 |
| 2.3.5 5L发酵罐优化产酶条件 | 第33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-49页 |
| 2.4.1 生物量的测定方法 | 第34页 |
| 2.4.2 产物和底物标准曲线 | 第34页 |
| 2.4.3 碳源优化 | 第34-36页 |
| 2.4.4 氮源优化 | 第36-37页 |
| 2.4.5 pH优化 | 第37页 |
| 2.4.6 无机盐优化实验 | 第37-39页 |
| 2.4.7 金属离子优化实验 | 第39-40页 |
| 2.4.8 诱导剂浓度实验 | 第40-41页 |
| 2.4.9 诱导温度对产酶影响实验 | 第41页 |
| 2.4.10 诱导时机对产酶影响实验 | 第41-42页 |
| 2.4.11 重组菌产酶过程实验 | 第42-43页 |
| 2.4.12 摇瓶中优化后的产酶培养条件与其他培养方法对比 | 第43页 |
| 2.4.13 重组菌腈水解酶静息细胞催化转化外消旋型扁桃腈生成R-(-)-扁桃酸 | 第43-44页 |
| 2.4.14 发酵罐与摇瓶对比试验 | 第44-45页 |
| 2.4.15 补料培养基的选择 | 第45-46页 |
| 2.4.16 流加补料实验 | 第46-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第三章 重组大肠杆菌静息细胞催化外消旋扁桃腈产R-(-)-扁桃酸工艺条件优化 | 第52-68页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-55页 |
| 3.2.1 菌种与培养基 | 第52-53页 |
| 3.2.2 主要仪器和试剂以及样品检测 | 第53页 |
| 3.2.3 静息细胞的制备 | 第53页 |
| 3.2.4 静息细胞催化转化 | 第53-55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-65页 |
| 3.3.1 产酶最适温度的选择 | 第55-56页 |
| 3.3.2 产酶最适pH的选择 | 第56-57页 |
| 3.3.3 pH稳定性 | 第57-58页 |
| 3.3.4 静息细胞不同处理方式对酶活的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.5 热稳定性 | 第59-60页 |
| 3.3.6 金属离子对酶活的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.7 不同菌体浓度对转化进程的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.8 游离细胞反应批次实验 | 第62-63页 |
| 3.3.9 底物流加转化试验 | 第63-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 第四章 重组大肠杆菌静息细胞催化反应动力学和底物特异性的研究 | 第68-82页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 材料与方法 | 第68-71页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第68页 |
| 4.2.2 主要仪器和试剂 | 第68-69页 |
| 4.2.3 静息细胞的制备 | 第69页 |
| 4.2.4 检测方法 | 第69页 |
| 4.2.5 静息细胞催化动力学研究 | 第69-70页 |
| 4.2.6 不同菌体浓度对应的底物抑制浓度 | 第70页 |
| 4.2.7 静息细胞催化转化三种氯代扁桃腈反应进程 | 第70-71页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第71-80页 |
| 4.3.1 三种氯代衍生酸标准曲线 | 第71页 |
| 4.3.2 静息细胞催化转化扁桃腈反应动力学 | 第71-73页 |
| 4.3.3 静息细胞催化转化邻氯扁桃腈反应动力学 | 第73-74页 |
| 4.3.4 静息细胞催化转化间氯扁桃腈反应动力学 | 第74-75页 |
| 4.3.5 静息细胞催化转化对氯扁桃腈反应动力学 | 第75-76页 |
| 4.3.6 不同静息细胞浓度对应的底物抑制浓度试验 | 第76-78页 |
| 4.3.7 静息细胞催化转化三种氯代扁桃腈反应进程 | 第78-80页 |
| 4.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 附录一 实验涉及的主要仪器设备 | 第84-85页 |
| 附录二 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的操作步骤及条件 | 第85-86页 |
| 附录三 甘油三脂测定试剂盒测甘油残量方法 | 第86-87页 |
| 附录四 本文所用到的缓冲液配方 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第89页 |
