| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 古菌概述 | 第13-14页 |
| 1.2 硫化叶菌 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞分裂机制 | 第15-23页 |
| 1.3.1 细胞分裂机制概述 | 第15页 |
| 1.3.2 ESCRT复合物 | 第15-16页 |
| 1.3.3 真核胞质分裂 | 第16-20页 |
| 1.3.4 ESCRT-Ⅲ相关研究 | 第20-21页 |
| 1.3.5 硫化叶菌中细胞分裂机制的研究 | 第21-23页 |
| 1.4 硫化叶菌遗传操作系统 | 第23-26页 |
| 1.4.1 冰岛硫化叶菌过表达系统 | 第24-25页 |
| 1.4.2 冰岛硫化叶菌基因敲除系统 | 第25-26页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 SIRE_1200突变体体内过表达分析 | 第27-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 SiRe_1200的同源模建、保守性分析及突变体设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2 SiRe_1200突变体的构建 | 第28页 |
| 2.2.3 SiRe_1200突变体质粒的电转化 | 第28页 |
| 2.2.4 过表达菌株S.islandicus/pSeSD-SiRe_1200Δα5C-C-His与S.islandicus/pSeSD-SiRe_1200ΔC-C-His的筛选和鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 SiRe_1200突变体蛋白的表达、纯化 | 第29页 |
| 2.2.6 SiRe_1200突变体蛋白的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 SiRe_1200及突变体过表达对细胞生长的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.8 S.islandicus/pSeSD-SiRe_1200AC-C-His的SiRe_1200表达量分析 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-42页 |
| 2.3.1 SiRe_1200的同源模建及保守性分析 | 第30-32页 |
| 2.3.2 SiRe_1200突变体载体构建 | 第32-34页 |
| 2.3.3 SiRe_1200突变体质粒的电转化、菌株的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 SiRe_1200突变体蛋白的表达、纯化及Western blot验证 | 第35-36页 |
| 2.3.5 SiRe_1200及突变体过表达对细胞生长的影响 | 第36-41页 |
| 2.3.6 S. islandicus/pSeSD-SiRe_1200AC-C-His的SiRe_1200表达量分析 | 第41-42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 SIRE_1550基因的敲除及必需性分析 | 第45-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 SiRe_1550敲除载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.2 pK-SiRe_1550敲除载体电转化 | 第46页 |
| 3.2.3 SiRe_1550敲除菌株的筛选和鉴定 | 第46页 |
| 3.2.4 SiRe_1550敲除型比例分析 | 第46-47页 |
| 3.2.5 SiRe_1550敲除对细胞生长的影响 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-54页 |
| 3.3.1 SiRe_1550敲除设计 | 第47-48页 |
| 3.3.2 SiRe_1550敲除菌株的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 SiRe_1550敲除菌株的筛选和鉴定 | 第49-51页 |
| 3.3.4 SiRe_1550敲除型比例分析 | 第51-52页 |
| 3.3.5 SiRe_1550敲除对细胞生长的影响 | 第52-54页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 SIRE_1388基因的敲除及必需性分析 | 第56-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 4.2.1 SiRe_1388敲除载体的构建 | 第56页 |
| 4.2.2 pK-SiRe_1388敲除载体电转化 | 第56-57页 |
| 4.2.3 SiRe_1388敲除菌株的筛选和鉴定 | 第57页 |
| 4.2.4 SiRe_1388敲除对细胞生长的影响 | 第57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 4.3.1 SiRe_1388敲除设计 | 第57-58页 |
| 4.3.2 SiRe_1388敲除菌株的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.3 SiRe_1388敲除菌株的筛选和鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.4 SiRe_1388敲除对细胞生长的影响 | 第60-61页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 SIRE_1200及突变体蛋白定位分析 | 第64-72页 |
| 5.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 5.2.1 细胞膜质分离实验 | 第64-65页 |
| 5.2.2 免疫荧光实验 | 第65页 |
| 5.3 实验结果 | 第65-70页 |
| 5.3.1 SiRe_1200定位到分裂的细胞中间 | 第65-66页 |
| 5.3.2 SiRe_1200突变体定位在细胞周边 | 第66-69页 |
| 5.3.3 SiRe_1200在S.islandicus/"ΔSiRe_1550”、ΔSiRe_1388免疫荧光定位情况 | 第69-70页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 总结与展望 | 第72-77页 |
| 6.1 总结 | 第72-74页 |
| 6.2 展望 | 第74-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
| 附录一: 本文所使用的冰岛硫化叶菌培养基 | 第77-80页 |
| 附录二: 冰岛硫化叶菌的电转化步骤 | 第80-82页 |
| 附录三: 本文所使用的引物、质粒及菌株 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92页 |
