| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10页 |
| 缩写词 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1 研究背景 | 第12页 |
| 2 副猪嗜血杆菌病原及其致病性的研究进展 | 第12-15页 |
| 2.1 副猪嗜血杆菌的生物学特征 | 第12页 |
| 2.2 副猪嗜血杆菌的血清学 | 第12-13页 |
| 2.3 副猪嗜血杆菌的致病性 | 第13-15页 |
| 2.3.1 毒力因子 | 第13-15页 |
| 2.3.1.1 三聚自转运蛋白 | 第13页 |
| 2.3.1.2 转铁结合蛋白 | 第13-14页 |
| 2.3.1.3 外膜蛋白 | 第14页 |
| 2.3.1.4 神经氨酸酶 | 第14页 |
| 2.3.1.5 脂寡糖 | 第14-15页 |
| 2.3.2 致病机理 | 第15页 |
| 3 蛋白质组学的研究进展 | 第15-20页 |
| 3.1 蛋白质组学研究内容 | 第16-17页 |
| 3.1.1 表达蛋白质组学 | 第16页 |
| 3.1.2 细胞谱蛋白质组学 | 第16页 |
| 3.1.3 功能蛋白质组学 | 第16-17页 |
| 3.2 蛋白质组学技术 | 第17-19页 |
| 3.2.1 二维凝胶电泳技术 | 第17页 |
| 3.2.2 2-D荧光差异凝胶电泳技术 | 第17页 |
| 3.2.3 同位素亲和标签技术 | 第17-18页 |
| 3.2.4 多维蛋白鉴定技术 | 第18页 |
| 3.2.5 飞行质谱技术 | 第18页 |
| 3.2.6 生物信息学技术 | 第18-19页 |
| 3.3 蛋白质组学在细菌上的应用 | 第19-20页 |
| 3.3.1 发现新蛋白 | 第19页 |
| 3.3.2 致病机制的研究 | 第19页 |
| 3.3.3 耐药机制的研究 | 第19-20页 |
| 4 本项目的研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌双向电泳体系的建立和优化 | 第21-37页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验菌株 | 第21页 |
| 2.2 主要设备 | 第21页 |
| 2.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.4 方法 | 第22-29页 |
| 2.4.1 样品制备 | 第22页 |
| 2.4.2 蛋白质定量(BCA法) | 第22-23页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE制备及电泳 | 第23页 |
| 2.4.4 蛋白裂解液的优化 | 第23页 |
| 2.4.5 不同前处理对试验结果的影响 | 第23-24页 |
| 2.4.6 双向电泳 | 第24-29页 |
| 2.4.6.1 第一向等点聚焦(IEF) | 第24-26页 |
| 2.4.6.2 IPG胶条的平衡 | 第26-27页 |
| 2.4.6.3 垂直SDS-PAGE | 第27-28页 |
| 2.4.6.4 凝胶染色 | 第28-29页 |
| 2.4.7 凝胶图像分析 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 3.1 蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| 3.2 SDS-PAGE图谱 | 第30页 |
| 3.3 蛋白质裂解液的优化 | 第30-31页 |
| 3.4 采用2-D CLEAN UP试剂盒处理结果对比 | 第31-32页 |
| 3.5 样品上样量的确定(24CM) | 第32-33页 |
| 3.6 等电聚焦时间的优化(24CM) | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌血清4型菌株的比较蛋白质组学研究 | 第37-44页 |
| 1 前言 | 第37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-38页 |
| 2.1 菌株 | 第37页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.3 试剂 | 第37页 |
| 2.4 双向电泳 | 第37-38页 |
| 2.4.1 第一向等电聚焦(IEF) | 第37页 |
| 2.4.2 胶条平衡 | 第37-38页 |
| 2.4.3 垂直SDS-PAGE | 第38页 |
| 2.4.4 凝胶染色 | 第38页 |
| 2.5 凝胶图像分析 | 第38页 |
| 2.6 胶点蛋白鉴定 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.1 副猪嗜血杆菌银染图谱(24CM) | 第38-40页 |
| 3.2 胶点蛋白鉴定结果与分析 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌血清4型菌株的免疫蛋白质组学研究 | 第44-61页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 材料 | 第44页 |
| 2.1 主要试剂 | 第44页 |
| 2.2 主要仪器 | 第44页 |
| 3 方法 | 第44-46页 |
| 3.1 副猪嗜血杆菌的双向电泳 | 第44-46页 |
| 3.1.1 第一向等电聚焦(IEF) | 第44-45页 |
| 3.1.2 胶条平衡 | 第45页 |
| 3.1.3 垂直SDS-PAGE | 第45页 |
| 3.1.4 凝胶染色 | 第45-46页 |
| 3.2 免疫印迹 | 第46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-57页 |
| 4.1 副猪嗜血杆菌血清4型菌株A的WESTERN-BLOTTING | 第46-47页 |
| 4.2 副猪嗜血杆菌血清4型菌株A的质谱鉴定 | 第47-52页 |
| 4.3 副猪嗜血杆菌血清4型菌株B的WESTERN-BLOTTING | 第52-53页 |
| 4.4 副猪嗜血杆菌血清4型菌株B的质谱鉴定 | 第53-56页 |
| 4.5 副猪嗜血杆菌血清4型菌株免疫蛋白比较 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录:主要实验试剂配制 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
