| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第14-23页 |
| 第一章 假想基因的研究方法 | 第15-21页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 假想基因之生物信息学研究 | 第16-17页 |
| ·假想基因的筛选 | 第16-17页 |
| ·表达序列标签(EST)技术应用于假想基因的筛选 | 第16页 |
| ·基因表达序列分析(SAGE)技术应用于假想基因筛选 | 第16-17页 |
| ·生物信息预测应用于假想基因研究 | 第17页 |
| 3 假想基因之实验方法研究 | 第17-20页 |
| ·定位技术应用于假想基因研究 | 第17-18页 |
| ·蛋白互作应用于假想基因研究 | 第18-20页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第18-19页 |
| ·GST(glutathione S-transferase)-pull down 技术 | 第19页 |
| ·免疫共沉淀（co-immunoprecipitation） | 第19-20页 |
| ·结晶技术应用于假想基因研究 | 第20页 |
| 4 展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-23页 |
| 1 实验目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第二部分 研究论文 | 第23-72页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第24-33页 |
| 1 生物信息学工具 | 第24页 |
| 2 分析流程及结果 | 第24-31页 |
| ·Bm-P312 基因序列的分析 | 第24-25页 |
| ·疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·信号肽和跨膜区预测 | 第26-27页 |
| ·二级结构预测 | 第27-28页 |
| ·功能位点预测 | 第28-29页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第29页 |
| ·氨基酸序列同源性分析 | 第29-31页 |
| ·进化树分析 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 家蚕Bm-P312 基因的克隆与原核表达 | 第33-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·订购试剂 | 第33页 |
| ·自配试剂 | 第33-36页 |
| 2 方法 | 第36-42页 |
| ·Bm-P312 基因的克隆 | 第36-40页 |
| ·PCR 扩增Bm-P312 | 第36-37页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37页 |
| ·凝胶回收、纯化PCR 产物 | 第37-38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第38页 |
| ·连接反应 | 第38页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli TG1 感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm-P312 的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·挑斑与质粒抽提 | 第39页 |
| ·PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列测定 | 第40页 |
| ·Bm-P312 融合蛋白的表达 | 第40-42页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli BL21 感受态细胞 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm-P312 的筛选与鉴定 | 第40页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达. | 第40-41页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第42-43页 |
| ·重组质粒PCR 和酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第43页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 重组蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第46-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第46-48页 |
| ·材料与仪器 | 第46页 |
| ·订购试剂 | 第46页 |
| ·自配试剂 | 第46-48页 |
| 2. 方法 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白His-Bm-P312 的纯化 | 第48-49页 |
| ·大量重组蛋白的表达与样品制备 | 第48-49页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第49页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度 | 第49页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| ·抗原的制备 | 第49-50页 |
| ·免疫新西兰大白兔 | 第50页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第50页 |
| ·抗体的纯化 | 第50-51页 |
| ·间接ELISA 方法测定抗体效价 | 第51-52页 |
| ·Western blotting 检测抗体特异性 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第53页 |
| ·间接ELISA 方法测定抗体效价 | 第53-54页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 免疫细胞化学 | 第57-60页 |
| 1 材料与试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·订购试剂 | 第57页 |
| ·自配试剂 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 家蚕Bm-P312 基因的转录和表达水平分析 | 第60-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·订购试剂 | 第60页 |
| ·自配试剂 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-65页 |
| ·总RNA 的提取 | 第61-62页 |
| ·总RNA 的DNase I(RNase free)酶解 | 第62-63页 |
| ·合成CDNA 第一链 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR | 第64页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第64-65页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第65页 |
| ·Western blotting 检测Bm-P312 蛋白在家蚕各发育时期和组织的分布 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕不同发育时期的转录和表达水平分析 | 第65-67页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕不同发育时期的转录水平分析 | 第65-67页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕不同发育时期的表达水平分析 | 第67页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕五龄幼虫各组织中的转录和表达水平分析 | 第67-70页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕五龄幼虫各组织中的转录水平分析 | 第67-70页 |
| ·Bm-P312 基因在家蚕五龄幼虫各组织中的表达水平分析 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
