| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 NGAL简介 | 第10-12页 |
| 1.2 基因工程抗体简介 | 第12-15页 |
| 1.2.1 基因工作抗体的种类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 基因工程抗体的表达系统 | 第13-15页 |
| 1.3 噬菌体抗体库技术及其应用的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 噬茵体抗体库技术的优点 | 第15页 |
| 1.3.2 噬菌体抗体的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.3 目标抗体的筛选与表达 | 第16-17页 |
| 1.3.4 噬菌体抗体库技术应用的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 免疫胶体金技术概述 | 第18-19页 |
| 1.4.1 免疫胶体金技术的基本原理 | 第18-19页 |
| 1.4.2 免疫胶体金技术的优点 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 NGAL噬菌体抗体库的构建 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.1 实验试剂及材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3 试验方法 | 第22-26页 |
| 2.3.1 BALB/c鼠免疫 | 第22页 |
| 2.3.2 小鼠脾脏总RNA提取 | 第22页 |
| 2.3.3 反转录合成cDNA | 第22页 |
| 2.3.4 PCR扩增小鼠抗体轻链、重链基因 | 第22-24页 |
| 2.3.5 ScFv的PCR扩增 | 第24页 |
| 2.3.6 ScFv基因与载体pCantab5E酶切 | 第24页 |
| 2.3.7 抗体基因ScFv与载体pCantab5E连接 | 第24-25页 |
| 2.3.8 连接产物电击转化 | 第25页 |
| 2.3.9 噬菌体抗体库重组率鉴定和多样性分析 | 第25-26页 |
| 2.4 试验结果 | 第26-29页 |
| 2.4.1 NGAL蛋白免疫小鼠血清效价测定 | 第26页 |
| 2.4.2 小鼠脾脏RNA提取 | 第26页 |
| 2.4.3 小鼠抗体VH和VL PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.4.4 ScFv基因PCR拼接 | 第27页 |
| 2.4.5 NGAL小鼠噬菌体抗体库库容 | 第27-28页 |
| 2.4.6 噬菌体抗体库的插入率及多样性分析 | 第28-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 NGAL噬菌体抗体库的筛选及抗体表达 | 第31-42页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 3.2.1 实验试剂及材料 | 第31-32页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第32页 |
| 3.3 试验方法 | 第32-37页 |
| 3.3.1 噬菌体表面展示抗体库的制备 | 第32页 |
| 3.3.2 NGAL噬菌体抗体库的筛选 | 第32-33页 |
| 3.3.3 ELISA鉴定重组噬菌体单克隆 | 第33页 |
| 3.3.4 阳性克隆序列分析 | 第33页 |
| 3.3.5 重组抗体真核表达载体构建 | 第33-34页 |
| 3.3.6 表达质粒转化CHO细胞 | 第34页 |
| 3.3.7 双抗夹心ELISA方法检测重组抗体的表达 | 第34-35页 |
| 3.3.8 重组抗体的纯化 | 第35页 |
| 3.3.9 纯化抗体的SDS-PAGE鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.10 ELISA鉴定纯化后抗体活性 | 第36页 |
| 3.3.11 亲和力测定 | 第36-37页 |
| 3.4 试验结果 | 第37-40页 |
| 3.4.1 NGAL噬菌体抗体库的富集 | 第37页 |
| 3.4.2 噬菌体单克隆鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4.3 噬菌体抗体基因序列 | 第38页 |
| 3.4.4 抗体基因表达载体构建 | 第38-39页 |
| 3.4.5 ELISA鉴定细胞表达上清 | 第39页 |
| 3.4.6 纯化抗体SDS-PAGE鉴定 | 第39页 |
| 3.4.7 纯化抗体的活性鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.8 纯化抗体的活性鉴定 | 第40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 第四章 NGAL基因工程抗体在免疫胶体金检测方法中的应用 | 第42-52页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第42-43页 |
| 4.2.1 实验试剂及材料 | 第42页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 4.3 试验方法 | 第43-46页 |
| 4.3.1 金标抗体的制备与纯化 | 第43页 |
| 4.3.2 结合垫、样品垫的预处理 | 第43页 |
| 4.3.3 金垫的制备及抗体喷涂 | 第43页 |
| 4.3.4 免疫胶体金测试条的组装 | 第43-44页 |
| 4.3.5 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第44-46页 |
| 4.3.6 测试方法与评判 | 第46页 |
| 4.3.7 特异性试验 | 第46页 |
| 4.3.8 稳定性试验 | 第46页 |
| 4.3.9 对临床样品的检测 | 第46页 |
| 4.4 试验结果 | 第46-50页 |
| 4.4.1 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第46-49页 |
| 4.4.2 特异性试验 | 第49页 |
| 4.4.3 稳定性试验 | 第49-50页 |
| 4.4.4 对临床样品的检测 | 第50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第五章 总结和展望 | 第52-53页 |
| 5.1 总结 | 第52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 硕士期间发表论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
