| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 肠道致病菌的感染以及耐酸研究意义 | 第12页 |
| 1.2 肠道致病菌的耐酸机理研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 大肠杆菌的耐酸机理 | 第12-19页 |
| 1.2.1.1 大肠杆菌的耐酸系统 | 第12-15页 |
| 1.2.1.2 大肠杆菌中的耐酸系统的调控 | 第15-19页 |
| 1.2.2 其他肠道致病菌的耐酸机理研究 | 第19-20页 |
| 1.3 假结核耶尔森氏菌耐酸研究现状 | 第20-23页 |
| 1.3.1 假结核耶尔森氏菌简介 | 第20页 |
| 1.3.2 假结核耶尔森氏菌致病性研究 | 第20-21页 |
| 1.3.3 假结核耶尔森氏菌的耐酸研究 | 第21-23页 |
| 1.4 本研究的意义和主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 rovM和adiA缺失突变体构建 | 第27-31页 |
| 2.2.1.1 rovM和adiA上下游同源臂片段扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 目的片段与载体的双酶切反应 | 第28页 |
| 2.2.1.3 连接反应 | 第28-29页 |
| 2.2.1.4 E. coli感受态制备 | 第29页 |
| 2.2.1.5 转化 | 第29页 |
| 2.2.1.6 菌落PCR及双酶切反应验证 | 第29-31页 |
| 2.2.1.7 同源重组构建rovM和adiA缺失突变体 | 第31页 |
| 2.2.2 rovM和adiA回复突变株构建 | 第31-33页 |
| 2.2.2.1 pKT100- rovM和pKT100- adiA克隆构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2.2 YPIII感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.2.3 转化 | 第32-33页 |
| 2.2.3 RovM蛋白原核表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3.1 pET15b-rovM克隆构建 | 第33页 |
| 2.2.3.2 RovM蛋白表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.4 报告基因融合及 β-gal酶活测定 | 第34-35页 |
| 2.2.4.1 报告基因lacZ融合菌株构建 | 第34页 |
| 2.2.4.2 β-gal酶活测定 | 第34-35页 |
| 2.2.5 凝胶迁移实验 | 第35页 |
| 2.2.6 DNase I footprint检测 | 第35页 |
| 2.2.7 精氨酸脱羧酶活性定性分析 | 第35-36页 |
| 2.2.8 耐酸存活率测定 | 第36页 |
| 2.2.9 实时定量PCR（qRT-PCR）测定 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-47页 |
| 3.1RovM参与假结核耶尔森氏菌YPIII的耐酸过程 | 第37-38页 |
| 3.1.1 突变株 ΔrovM构建及验证 | 第37页 |
| 3.1.2 RovM对假结核耶尔森氏菌YPIII耐酸的影响 | 第37-38页 |
| 3.2 验证AR3系统参与假结核耶尔森氏菌YPIII耐酸过程 | 第38-40页 |
| 3.2.1 突变株 ΔadiA及回复菌株 ΔadiA-com构建及验证 | 第38-39页 |
| 3.2.2 通过存活率测定验证AR3系统对假结核耶尔森氏菌YPIII抗酸的影响 | 第39页 |
| 3.2.3 精氨酸脱羧酶(AdiA)活性测定 | 第39-40页 |
| 3.3 RovM对假结核耶尔森氏菌YPIII中AR3系统的调控 | 第40-42页 |
| 3.3.1 RovM对精氨酸脱羧酶(AdiA)活性的调控 | 第40-41页 |
| 3.3.2 融合启动子酶活分析RovM对AR3系统表达水平的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.3 qRT-PCR分析RovM对AR3系统表达水平的影响 | 第42页 |
| 3.4 RovM对假结核耶尔森氏菌YPIII中AR3系统调控机理 | 第42-47页 |
| 3.4.1 RovM直接结合于AR3系统启动子adip | 第42-44页 |
| 3.4.2 RovM蛋白在AR3系统的启动子adip上的结合位点分析 | 第44-47页 |
| 3.4.2.1 adip启动子截短分析 | 第44-45页 |
| 3.4.2.2 DNase I足迹法检测分析 | 第45-46页 |
| 3.4.2.3 adip启动子分析 | 第46-47页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
