| 中文摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 PRRSV概论 | 第12页 |
| 1.2 PRRSV的基因组结构 | 第12-18页 |
| 1.2.1 非结构蛋白的种类和功能 | 第14-16页 |
| 1.2.2 结构蛋白的种类和功能 | 第16-18页 |
| 1.3 PRRSV复制过程 | 第18-19页 |
| 1.4 合成病毒学的发展与应用 | 第19-21页 |
| 1.5 本论文研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 PRRSVnsp12基因的克隆表达与多克隆抗体的制备 | 第22-33页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22页 |
| 2.1.1 工程菌株和质粒载体 | 第22页 |
| 2.1.2 器材与试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法步骤 | 第22-26页 |
| 2.2.1 pTriEx-nsp12载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.2 nsp12蛋白表达条件优化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 nsp12的纯化 | 第24页 |
| 2.2.4 nsp12多克隆抗体的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.5 斑点杂交对抗血清效价的初步检测 | 第25页 |
| 2.2.6 Western Blot检测nsp12原核表达 | 第25页 |
| 2.2.7 Western Blot检测nsp12在PRRSV感染的MARC145细胞中的表达 | 第25页 |
| 2.2.8 融合蛋白nsp12-GFP亚细胞定位 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.3.1 pTriEx-nsp12质粒的构建 | 第26页 |
| 2.3.2 nsp12蛋白表达纯化 | 第26-28页 |
| 2.3.3 免疫血清的检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Western Blot检测nsp12原核表达 | 第29-30页 |
| 2.3.5 pTriEx-nsp12-GFP亚细胞定位 | 第30页 |
| 2.3.6 nsp12在PRRSV感染的MARC145细胞中的表达 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 PRRSV反向遗传系统及致弱病毒感染型cDNA克隆的构建 | 第33-39页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第33页 |
| 3.1.1 工程菌株和质粒载体 | 第33页 |
| 3.1.2 器材与试剂 | 第33页 |
| 3.2 实验方法步骤 | 第33-36页 |
| 3.2.1 感染型cDNA克隆的构建 | 第33-36页 |
| 3.2.2 感染型cDNA克隆转染MARC145细胞包装病毒 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 质粒pTriEx-FL12的构建 | 第36-38页 |
| 3.3.2 质粒pTriEx-FL12Δ 的构建 | 第38页 |
| 3.3.3 pTriEx-FL12和pTriEx-FL12Δ 转染MARC145细胞 | 第38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 带有核酶序列的病毒感染型cDNA克隆的构建 | 第39-45页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第39页 |
| 4.1.1 工程菌株和质粒载体 | 第39页 |
| 4.1.2 器材与试剂 | 第39页 |
| 4.2 实验方法步骤 | 第39-41页 |
| 4.2.1 pTriExHH-FL12质粒的构建 | 第39-41页 |
| 4.2.2 pTriExHH-FL12转染MARC145细胞包装病毒 | 第41页 |
| 4.2.3 pTri ExHH-linker-GFP和pTriEx-linker-GFP载体的构建和转染细胞的GFP荧光检测 | 第41页 |
| 4.3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 4.3.1 质粒pTriExHH-linker的构建 | 第41-42页 |
| 4.3.2 质粒pTriExHH-FL12的构建 | 第42页 |
| 4.3.3 pTriExHH-FL12转染MARC145细胞包装病毒 | 第42页 |
| 4.3.4 pTriExHH-linker-GFP和pTriEx-linker-GFP质粒真核细胞表达GFP显微观察 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 PRRSV5’UTR和 3’UTR与非结构蛋白之间的互作 | 第45-50页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第45页 |
| 5.1.1 工程菌株和质粒载体 | 第45页 |
| 5.1.2 器材与试剂 | 第45页 |
| 5.2 实验方法步骤 | 第45-47页 |
| 5.2.1 PRRSV3’非翻译区质粒载体的构建 | 第45-46页 |
| 5.2.2 非结构蛋白表达纯化 | 第46页 |
| 5.2.3 PRRSV的 5’和 3’非翻译区同非结构蛋白的互作 | 第46-47页 |
| 5.3 结果与分析 | 第47-48页 |
| 5.3.1 非结构蛋白表达纯化 | 第47页 |
| 5.3.2 pTriEx-3EMSA质粒载体的构建 | 第47-48页 |
| 5.3.3 凝胶阻滞电泳检测PRRSV 5’和 3’非翻译区同非结构蛋白的互作 | 第48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 附录 1 | 第60-61页 |
| 附录 2 | 第61-63页 |
| 附录 3 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
