| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写词语表 | 第10-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-37页 |
| 第一章 牛传染性鼻气管炎病毒的研究进展 | 第17-31页 |
| 1.1 IBRV概况 | 第17-26页 |
| 1.1.1 病原学特性 | 第17-20页 |
| 1.1.2 流行现状 | 第20-22页 |
| 1.1.3 牛传染性鼻气管炎病毒感染 | 第22-25页 |
| 1.1.4 临床症状 | 第25-26页 |
| 1.2 诊断技术 | 第26-27页 |
| 1.2.1 病原学检测 | 第26页 |
| 1.2.2 血清学检测 | 第26-27页 |
| 1.3 防制措施 | 第27-31页 |
| 1.3.1 常规疫苗 | 第27-28页 |
| 1.3.2 新型疫苗 | 第28-31页 |
| 第二章 牛副流感病毒3型的研究进展 | 第31-37页 |
| 2.1 BPIV3概况 | 第31-34页 |
| 2.1.1 病原学特征 | 第31-32页 |
| 2.1.2 流行现状 | 第32-33页 |
| 2.1.3 病毒感染特点 | 第33页 |
| 2.1.4 临床症状 | 第33页 |
| 2.1.5 HN基因是BPIV3的主要保护性抗原 | 第33-34页 |
| 2.2 诊断技术 | 第34-35页 |
| 2.2.1 病毒的分离与鉴定 | 第34页 |
| 2.2.2 免疫学诊断方法 | 第34-35页 |
| 2.2.3 分子生物学诊断方法 | 第35页 |
| 2.3 防制措施 | 第35-37页 |
| 2.3.1 常规疫苗 | 第35-36页 |
| 2.3.2 新型疫苗 | 第36-37页 |
| 第二篇 研究内容 | 第37-87页 |
| 第一章 牛传染性鼻气管炎病毒气溶胶检测方法的建立 | 第37-44页 |
| 1.1 材料与方法 | 第37-40页 |
| 1.1.1 病毒株 | 第37页 |
| 1.1.2 菌株、试剂与仪器 | 第37页 |
| 1.1.3 引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| 1.1.4 待测样本的制备 | 第38页 |
| 1.1.5 标准质粒阳性模板的制备 | 第38-39页 |
| 1.1.6 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的扩增条件的确立 | 第39页 |
| 1.1.7 标准曲线的建立 | 第39页 |
| 1.1.8 特异性、灵敏度和重复性试验 | 第39页 |
| 1.1.9 气溶胶样本的检测 | 第39-40页 |
| 1.2 结果与分析 | 第40-43页 |
| 1.2.1 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件的确定及标准曲线的建立 | 第40-41页 |
| 1.2.2 特异性试验 | 第41页 |
| 1.2.3 敏感性试验 | 第41-42页 |
| 1.2.4 重复性试验 | 第42页 |
| 1.2.5 临床气溶胶样本的检测 | 第42-43页 |
| 1.3 讨论 | 第43页 |
| 1.4 小结 | 第43-44页 |
| 第二章 牛传染性鼻气管炎病毒TK缺失突变株的构建 | 第44-56页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 2.1.1 病毒株与细胞 | 第44页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第44页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第44-45页 |
| 2.1.4 病毒增殖及基因组DNA的制备 | 第45页 |
| 2.1.5 目的片段的扩增 | 第45-46页 |
| 2.1.6 重组质粒pcDNA3.1（+）-TKup及pEASY-T3-TED的构建 | 第46页 |
| 2.1.7 转移载体的构建 | 第46页 |
| 2.1.8 转移载体质粒的大量制备 | 第46-47页 |
| 2.1.9 转移载体与亲本病毒IBRV基因组DNA的共转染 | 第47页 |
| 2.1.10 重组病毒的纯化 | 第47-48页 |
| 2.1.11 重组病毒IBRV TK-/GFP+的鉴定 | 第48页 |
| 2.1.12 重组病毒与亲本病毒TCID50的测定 | 第48页 |
| 2.1.13 不同代次重组病毒GFP基因的扩增 | 第48页 |
| 2.2 结果 | 第48-55页 |
| 2.2.1 转移载体构建所需基因片段扩增 | 第48-50页 |
| 2.2.2 各个目的片段连接到载体后重组质粒的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.3 转移载体的构建 | 第51-53页 |
| 2.2.4 重组病毒的筛选和纯化 | 第53页 |
| 2.2.5 重组病毒的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2.6 重组病毒和亲本病毒TCID50的测定 | 第54页 |
| 2.2.7 不同代次重组病毒GFP基因的扩增 | 第54-55页 |
| 2.3 讨论 | 第55页 |
| 2.3.1 细胞转染 | 第55页 |
| 2.3.2 重组病毒的获得 | 第55页 |
| 2.3.3 外源基因的插入位点 | 第55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 牛传染性鼻气管炎病毒gE缺失突变株的构建 | 第56-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第56-60页 |
| 3.1.1 病毒株与细胞 | 第56页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第56页 |
| 3.1.3 引物合成 | 第56-57页 |
| 3.1.4 病毒增殖及基因组DNA的获得 | 第57页 |
| 3.1.5 目的片段的扩增 | 第57-58页 |
| 3.1.6 重组质粒pcDNA3.1（+）-gEup及pEASY-T3-GED的构建 | 第58页 |
| 3.1.7 转移载体的构建 | 第58页 |
| 3.1.8 转移载体质粒的大量制备 | 第58-59页 |
| 3.1.9 转移载体与亲本病毒IBRV基因组DNA的共转染 | 第59页 |
| 3.1.10 重组病毒的纯化 | 第59-60页 |
| 3.1.11 重组病毒IBRV gE-/EGFP+的鉴定 | 第60页 |
| 3.1.12 重组病毒与亲本病毒TCID50的测定 | 第60页 |
| 3.1.13 不同代次重组病毒GFP基因的扩增 | 第60页 |
| 3.2 结果 | 第60-66页 |
| 3.2.1 各个目的片段扩增 | 第60-62页 |
| 3.2.2 各个目的片段连接载体及重组质粒的鉴定 | 第62页 |
| 3.2.3 转移载体的构建 | 第62-64页 |
| 3.2.4 重组病毒的纯化 | 第64页 |
| 3.2.5 重组病毒的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.2.6 重组病毒和亲本病毒TCID50的测定 | 第65页 |
| 3.2.7 不同代次重组病毒GFP基因的扩增 | 第65-66页 |
| 3.3 讨论 | 第66页 |
| 3.4 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 BPIV3 HN基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备 | 第67-75页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-72页 |
| 4.1.1 病毒株与细胞 | 第67页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第67-68页 |
| 4.1.3 病毒基因组的提取 | 第68页 |
| 4.1.4 引物合成 | 第68页 |
| 4.1.5 BPIV3 HN蛋白的原核表达及纯化 | 第68-70页 |
| 4.1.6 多克隆抗体的制备、效价测定及特异性检测 | 第70-71页 |
| 4.1.7 病毒的增殖及中和实验 | 第71-72页 |
| 4.2 实验结果 | 第72-74页 |
| 4.2.1 重组载体pET32a(+)-HN的获得 | 第72页 |
| 4.2.2 诱导表达及纯化 | 第72-73页 |
| 4.2.3 多克隆抗体的制备及效价测定 | 第73页 |
| 4.2.4 血清中和实验 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 表达牛副流感病毒HN基因的重组牛传染性鼻气管炎病毒的构建及鉴定 | 第75-87页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-80页 |
| 5.1.1 病毒株与细胞 | 第75页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第75页 |
| 5.1.3 引物合成 | 第75-76页 |
| 5.1.4 病毒增殖及基因组DNA的制备 | 第76页 |
| 5.1.5 目的片段的扩增 | 第76-77页 |
| 5.1.6 转移载体的构建 | 第77页 |
| 5.1.7 转移载体质粒的大量制备 | 第77-78页 |
| 5.1.8 转移载体与亲本病毒IBRV基因组DNA的共转染 | 第78页 |
| 5.1.9 重组病毒的纯化 | 第78页 |
| 5.1.10 重组病毒IBRV gE-/HN+的PCR鉴定 | 第78-79页 |
| 5.1.11 重组病毒与亲本病毒TCID50的测定 | 第79页 |
| 5.1.12 HN基因表达的检测 | 第79-80页 |
| 5.1.13 HN基因在病毒中的稳定性 | 第80页 |
| 5.2 结果 | 第80-86页 |
| 5.2.1 目的基因的扩增 | 第80-82页 |
| 5.2.2 转移载体的构建 | 第82-83页 |
| 5.2.3 重组病毒IBRV gE-/HN+的筛选 | 第83-84页 |
| 5.2.4 重组病毒和亲本病毒TCID50的测定 | 第84-85页 |
| 5.2.5 HN基因的Western blotting检测 | 第85页 |
| 5.2.6 HN基因的遗传稳定性分析 | 第85-86页 |
| 5.3 讨论 | 第86页 |
| 5.4 小结 | 第86-87页 |
| 创新与特色 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105-106页 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 | 第106页 |
