| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 牛支原体病研究进展 | 第15-24页 |
| 1.1.1 牛支原体病原学 | 第15-16页 |
| 1.1.2 牛支原体流行病学 | 第16-17页 |
| 1.1.3 牛支原体病的临床症状与病理变化 | 第17-18页 |
| 1.1.4 牛支原体病的诊断 | 第18-20页 |
| 1.1.5 牛支原体病的防治 | 第20-21页 |
| 1.1.6 牛支原体引起的免疫反应 | 第21-22页 |
| 1.1.7 牛支原体膜蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.2 蛋白质组学概况 | 第24-28页 |
| 1.2.1 蛋白质组学的主要研究技术 | 第25-27页 |
| 1.2.2 蛋白质组学在动物医学中的应用 | 第27-28页 |
| 1.3 本研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 1.3.1 本研究的目的 | 第28-29页 |
| 1.3.2 本研究的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 利用免疫蛋白质组学筛选牛支原体免疫原性蛋白 | 第30-46页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 材料和方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 牛支原体及其培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 血清 | 第31页 |
| 2.2.3 主要材料与试剂 | 第31页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第31-32页 |
| 2.2.5 主要溶液及其配制 | 第32-33页 |
| 2.2.6 牛支原体全细胞蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.2.7 蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.2.8 双向电泳 | 第34-36页 |
| 2.2.9 免疫印迹 | 第36-37页 |
| 2.2.10 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及生物信息学分析 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-43页 |
| 2.3.1 牛支原体全细胞蛋白的提取及浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.3.2 牛支原体蛋白双向电泳图谱 | 第38-40页 |
| 2.3.3 牛支原体蛋白免疫印迹图谱 | 第40-41页 |
| 2.3.4 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白表达与免疫原性验证 | 第46-70页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 材料和方法 | 第46-61页 |
| 3.2.1 支原体 | 第46页 |
| 3.2.2 载体和菌株 | 第46页 |
| 3.2.3 主要材料、试剂及试剂盒 | 第46-48页 |
| 3.2.4 主要仪器与设备 | 第48页 |
| 3.2.5 主要溶液及其配制 | 第48-50页 |
| 3.2.6 牛支原体基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.2.7 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的扩增与定点突变 | 第51-57页 |
| 3.2.8 重组表达质粒pET-28a(+)-GAPDH、pET-28a(+)-PDHB和pET-28a(+)-FtsZ的构建与鉴定 | 第57-59页 |
| 3.2.9 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第59-60页 |
| 3.2.10 重组蛋白的免疫原性验证 | 第60-61页 |
| 3.3 结果 | 第61-68页 |
| 3.3.1 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的扩增 | 第61页 |
| 3.3.2 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的定点突变 | 第61-62页 |
| 3.3.3 重组表达质粒pET-28a(+)-GAPDH、pET-28a(+)-PDHB和pET-28a(+)-FtsZ的构建及双酶切鉴定 | 第62-64页 |
| 3.3.4 重组蛋白的诱导表达 | 第64-66页 |
| 3.3.5 重组蛋白GAPDH、PDHB和FtsZ的纯化与鉴定 | 第66-67页 |
| 3.3.6 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白抗原表位分析 | 第67-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68页 |
| 3.5 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 基于牛支原体重组蛋白的ELISA诊断方法的建立 | 第70-85页 |
| 4.1 引言 | 第70页 |
| 4.2 材料和方法 | 第70-74页 |
| 4.2.1 支原体菌种和实验动物 | 第70页 |
| 4.2.2 重组蛋白和阳性血清 | 第70-71页 |
| 4.2.3 主要材料与试剂 | 第71页 |
| 4.2.4 主要仪器和设备 | 第71页 |
| 4.2.5 多抗的制备 | 第71-72页 |
| 4.2.6 蛋白保守性和特异性分析 | 第72页 |
| 4.2.7 基于重组蛋白的间接ELISA (iELISA)检测方法的建立 | 第72-73页 |
| 4.2.8 iELISA反应条件的优化 | 第73-74页 |
| 4.2.9 iELISA检测特异性 | 第74页 |
| 4.2.10 iELISA与商品化试剂盒检测一致性的比较 | 第74页 |
| 4.2.11 iELISA与商品化试剂盒检测灵敏度的比较 | 第74页 |
| 4.2.12 数据统计分析 | 第74页 |
| 4.3 结果 | 第74-83页 |
| 4.3.1 蛋白序列同源性分析结果 | 第75-77页 |
| 4.3.2 牛支原体不同菌株之间蛋白的免疫原性 | 第77页 |
| 4.3.3 不同支原体及病原之间蛋白的免疫原性 | 第77-78页 |
| 4.3.4 rPDHB-iELISA反应条件的优化 | 第78-81页 |
| 4.3.5 rPDHB-iELISA检测特异性 | 第81-82页 |
| 4.3.6 iELISA与商品化试剂盒检测一致性比较结果 | 第82页 |
| 4.3.7 iELISA与商品化试剂盒检测灵敏度比较结果 | 第82-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.5 小结 | 第84-85页 |
| 第五章 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白免疫原性研究 | 第85-101页 |
| 5.1 引言 | 第85页 |
| 5.2 材料和方法 | 第85-90页 |
| 5.2.1 实验动物和牛支原体 | 第85页 |
| 5.2.2 主要材料与试剂 | 第85-87页 |
| 5.2.3 主要仪器与设备 | 第87页 |
| 5.2.4 制备牛支原体全细胞提取物 | 第87页 |
| 5.2.5 实验动物分组及免疫 | 第87页 |
| 5.2.6 血清抗体水平检测 | 第87-88页 |
| 5.2.7 血清抗体亚类检测 | 第88页 |
| 5.2.8 血清细胞因子的检测 | 第88-89页 |
| 5.2.9 小鼠脾脏淋巴细胞的分离 | 第89页 |
| 5.2.10 脾脏淋巴细胞亚群检测 | 第89-90页 |
| 5.2.11 ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞 | 第90页 |
| 5.3 结果 | 第90-98页 |
| 5.3.1 血清抗体水平检测 | 第90-91页 |
| 5.3.2 血清抗体亚类检测 | 第91-92页 |
| 5.3.3 血清细胞因子的检测 | 第92-95页 |
| 5.3.4 脾脏淋巴细胞亚群检测 | 第95-97页 |
| 5.3.5 ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞 | 第97-98页 |
| 5.4 讨论 | 第98-100页 |
| 5.5 小结 | 第100-101页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第101-103页 |
| 6.1 结论 | 第101页 |
| 6.2 创新点 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 作者简历 | 第113页 |
