| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1.1 SELEX技术 | 第15-25页 |
| 1.1.1 分离技术 | 第16-19页 |
| 1.1.2 单链制备 | 第19-21页 |
| 1.1.3 结合力的测定 | 第21-25页 |
| 1.2 基于适配体的检测应用平台 | 第25-30页 |
| 1.2.1 光学适配体生物传感器 | 第25-26页 |
| 1.2.2 质量灵敏传感器 | 第26-27页 |
| 1.2.3 电化学适配体传感器 | 第27-28页 |
| 1.2.4 酶联适配体学说 | 第28-29页 |
| 1.2.5 纳米材料传感器 | 第29-30页 |
| 1.3 牛支原体 | 第30-33页 |
| 1.3.1 病原学 | 第30-31页 |
| 1.3.2 流行病学 | 第31页 |
| 1.3.3 牛支原体膜蛋白研究现状 | 第31-32页 |
| 1.3.4 牛支原体的检测 | 第32-33页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 原核表达牛支原体P48蛋白 | 第34-49页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 菌株及实验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 仪器 | 第34页 |
| 2.1.3 试剂 | 第34-35页 |
| 2.2 方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 牛支原体全基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2 P48基因扩增及测序 | 第36-37页 |
| 2.2.3 P48基因定点突变 | 第37-38页 |
| 2.2.4 P48蛋白表达及纯化 | 第38-41页 |
| 2.2.5 Western Blotting验证P48蛋白 | 第41-42页 |
| 2.3 结果 | 第42-48页 |
| 2.3.1 P48基因的扩增 | 第42页 |
| 2.3.2 P48基因测序 | 第42-43页 |
| 2.3.3 基因定点突变 | 第43-44页 |
| 2.3.4 P48蛋白原核表达及纯化 | 第44-47页 |
| 2.3.5 Western Blotting | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48页 |
| 2.4.1 关于P48蛋白 | 第48页 |
| 2.4.2 关于P48基因突变 | 第48页 |
| 2.4.3 关于选择pET28 a(+))质粒 | 第48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 牛支原体P48蛋白单克隆抗体的筛选 | 第49-65页 |
| 3.1 材料 | 第49-52页 |
| 3.1.1 菌株、毒株及实验动物 | 第49-50页 |
| 3.1.2 仪器 | 第50页 |
| 3.1.3 试剂 | 第50-52页 |
| 3.2 方法 | 第52-58页 |
| 3.2.1 小鼠免疫 | 第52页 |
| 3.2.2 间接ELISA的建立 | 第52-53页 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第53-55页 |
| 3.2.4 单克隆抗体的生产 | 第55-57页 |
| 3.2.5 单抗特性的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3 结果 | 第58-63页 |
| 3.3.1 间接ELISA抗原浓度、一抗血清稀释度的优化以及6只免疫小鼠抗体效价的测定 | 第58-59页 |
| 3.3.2 阴阳性临界值的确定 | 第59-60页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第60页 |
| 3.3.4 单抗的鉴定和特性分析 | 第60-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-64页 |
| 3.4.1 关于小鼠免疫 | 第63页 |
| 3.4.2 关于亚克隆 | 第63页 |
| 3.4.3 关于表位 | 第63页 |
| 3.4.4 关于特异性 | 第63-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 P48蛋白核酸适配体的筛选 | 第65-86页 |
| 4.1 材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 仪器 | 第65页 |
| 4.1.2 试剂 | 第65-66页 |
| 4.1.3 溶液的配制 | 第66页 |
| 4.2 方法 | 第66-74页 |
| 4.2.1 CE-SELEX | 第66-68页 |
| 4.2.2 镍树脂SELEX | 第68-72页 |
| 4.2.3 微孔板SELEX | 第72-74页 |
| 4.3 结果 | 第74-84页 |
| 4.3.1 CE-SELEX结果 | 第74-77页 |
| 4.3.2 镍树脂法结果 | 第77-81页 |
| 4.3.3 微孔板法筛选适配体 | 第81-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-85页 |
| 4.4.1 关于筛选方法 | 第84页 |
| 4.4.2 关于鉴定方法 | 第84-85页 |
| 4.4.3 关于二级结构 | 第85页 |
| 4.5 小结 | 第85-86页 |
| 第五章 应用适配体、单克隆抗体建立牛支原体抗体检测方法 | 第86-102页 |
| 5.1 材料 | 第86页 |
| 5.2 方法 | 第86-90页 |
| 5.2.1 单抗10E和适配体WKB-14比较 | 第86-87页 |
| 5.2.2 直接竞争ELISA (Dc-ELISA)的建立 | 第87-88页 |
| 5.2.3 间接竞争ELAA (Ic-ELAA)方法的建立 | 第88-89页 |
| 5.2.4 检测牛血清临床样本 | 第89-90页 |
| 5.3 结果 | 第90-99页 |
| 5.3.1 mAb 10E与WKB-14敏感性与特异性比较 | 第90-91页 |
| 5.3.2 Dc-ELISA方法的建立 | 第91-95页 |
| 5.3.3 Ic-ELAA方法的建立 | 第95-98页 |
| 5.3.4 临床牛血清检测 | 第98-99页 |
| 5.4 讨论 | 第99-101页 |
| 5.4.1 关于mAb 10E与适配体WKB-14比较 | 第99-100页 |
| 5.4.2 关于特异性 | 第100页 |
| 5.4.3 关于Ic-ELAA | 第100-101页 |
| 5.4.4 关于五种血清学方法比较 | 第101页 |
| 5.5 小结 | 第101-102页 |
| 第六章 结论 | 第102-103页 |
| 第七章 创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
