| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 油菜菌核病、核盘菌及其致病机理的概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 核盘菌简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 核盘菌的生物学及防治研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 RNAi技术研究概述 | 第12-14页 |
| 1.3 氮素研究概述 | 第14-15页 |
| 1.4 硝酸还原酶研究概述 | 第15-17页 |
| 1.5 蛋白生物信息学研究概述 | 第17-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-25页 |
| 3.1 供试材料 | 第19页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第19页 |
| 3.1.2 供试植株 | 第19页 |
| 3.1.3 酶、抗生素和化学试剂 | 第19页 |
| 3.1.4 供试载体 | 第19页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第19页 |
| 3.1.6 常用缓冲溶液和培养基 | 第19页 |
| 3.2 供试方法 | 第19-20页 |
| 3.2.1 核盘菌FXGD_2菌丝总DNA和RNA的提取及cDNA的制备 | 第19-20页 |
| 3.2.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及酶连、转化 | 第20页 |
| 3.3 SsNR基因的克隆和测序 | 第20页 |
| 3.4 SsNR蛋白生物信息学预测 | 第20-21页 |
| 3.4.1 SsNR蛋白基本理化性质预测 | 第20页 |
| 3.4.2 SsNR蛋白结构域预测 | 第20页 |
| 3.4.3 SsNR蛋白亚细胞定位分析 | 第20页 |
| 3.4.4 SsNR蛋白互作蛋白预测 | 第20页 |
| 3.4.5 SsNR蛋白二级与三级结构预测分析 | 第20-21页 |
| 3.4.6 SsNR蛋白多序列比对及系统发育树构建 | 第21页 |
| 3.5 SsNR基因在核盘菌无性生活史各阶段转录分析 | 第21页 |
| 3.6 SsNR-pSilent-1沉默载体构建和转化 | 第21-22页 |
| 3.7 SsNR沉默突变体筛选 | 第22页 |
| 3.7.1 突变体HygB抗性验证 | 第22页 |
| 3.7.2 突变体RT-PCR验证 | 第22页 |
| 3.8 SsNR沉默突变体表性分析 | 第22-23页 |
| 3.8.1 SsNR沉默突变体菌丝生长速率测量与菌核形成观察 | 第22页 |
| 3.8.2 SsNR沉默突变体菌丝分支情况与侵染垫形成观察 | 第22-23页 |
| 3.8.3 SsNR沉默突变体草酸含量测定 | 第23页 |
| 3.8.4 SsNR沉默突变体致病力测定 | 第23页 |
| 3.8.5 SsNR沉默突变体对5种胁迫因子敏感性观察 | 第23页 |
| 3.9 SsNR基因沉默对其他致病相关基因表达量的影响 | 第23-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-45页 |
| 4.1 SsNR基因的克隆和测序 | 第25页 |
| 4.2 SsNR蛋白生物信息学预测 | 第25-33页 |
| 4.2.1 SsNR蛋白基本理化性质预测 | 第25-27页 |
| 4.2.2 SsNR蛋白结构域预测 | 第27-28页 |
| 4.2.3 SsNR蛋白亚细胞定位分析 | 第28页 |
| 4.2.4 SsNR蛋白互作蛋白预测 | 第28-29页 |
| 4.2.5 SsNR蛋白二级与三级结构预测分析 | 第29-32页 |
| 4.2.6 SsNR蛋白多序列比对及系统发育树构建 | 第32-33页 |
| 4.3 SsNR基因在核盘菌无性生活史各阶段转录分析 | 第33-34页 |
| 4.4 SsNR-pSilent-1沉默载体构建和验证 | 第34-35页 |
| 4.5 SsNR沉默突变体筛选和验证 | 第35-36页 |
| 4.5.1 SsNR突变体HygB抗性验证 | 第35页 |
| 4.5.2 SsNR突变体RT-PCR验证 | 第35-36页 |
| 4.6 SsNR沉默突变体表性分析 | 第36-43页 |
| 4.6.1 SsNR沉默突变体菌丝生长速率测量与菌核形成观察 | 第36-37页 |
| 4.6.2 SsNR沉默突变体菌丝分支情况与侵染垫形成观察 | 第37-38页 |
| 4.6.3 SsNR沉默突变体草酸含量测定 | 第38-39页 |
| 4.6.4 SsNR沉默突变体致病力测定 | 第39-40页 |
| 4.6.5 SsNR沉默突变体对5种胁迫因子敏感性观察 | 第40-43页 |
| 4.7 SsNR基因沉默对其他致病相关基因表达量的影响 | 第43-45页 |
| 5 小结与讨论 | 第45-48页 |
| 5.1 全文小结 | 第45页 |
| 5.2 讨论 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录 | 第55-58页 |
| 附录A SsNR蛋白多序列比对余下4个功能域 | 第55-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
