| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 氰化物的来源、种类和毒性 | 第13-15页 |
| 1.1.1 氰化物的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.2 氰化物的种类和毒性 | 第14-15页 |
| 1.2 氰降解酶的种类 | 第15-19页 |
| 1.2.1 腈水解酶 | 第16页 |
| 1.2.2 氰水合酶 | 第16-17页 |
| 1.2.3 氰水解酶 | 第17-19页 |
| 1.3 微生物对氰的代谢 | 第19-21页 |
| 1.4 含氰废水的生物治理 | 第21-22页 |
| 1.5 研究课题 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 本文主要工作 | 第23-24页 |
| 第二章 源自重组菌BL21-pET28a-cdE的降氰酶cdE的纯化 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 菌种与培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 氰根离子浓度的测定 | 第25页 |
| 2.2.2 蛋白浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 菌体酶活力检测方法 | 第26页 |
| 2.2.4 重组菌BL21-pET28a-cdE的稳定性 | 第26页 |
| 2.2.5 重组菌BL21-pET28a-cdE的表达稳定性 | 第26页 |
| 2.2.6 降氰酶cdE的纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| 2.2.8 反应pH与温度对酶活力影响 | 第28-29页 |
| 2.2.9 添加醇类稳定剂对cdE纯酶保藏稳定性的影响 | 第29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 2.3.1 重组菌BL21-pET28a-cdE的稳定性 | 第29-31页 |
| 2.3.2 重组菌BL21-pET28a-cdE的表达稳定性 | 第31-32页 |
| 2.3.3 大规模纯化降氰酶cdE | 第32-34页 |
| 2.3.4 反应pH与温度对酶活力的影响 | 第34-36页 |
| 2.3.5 添加醇类稳定剂对cdE纯酶保藏稳定性的影响 | 第36-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组菌BL21-pET28a-cdE的定点突变 | 第38-49页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第38页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 氰根离子浓度及降氰产物的测定 | 第39页 |
| 3.2.2 蛋白浓度测定 | 第39页 |
| 3.2.3 酶活力检测方法 | 第39-40页 |
| 3.2.4 突变引物的设计 | 第40页 |
| 3.2.5 突变体的制备 | 第40-42页 |
| 3.2.6 感受态细胞制备 | 第42页 |
| 3.2.7 菌体诱导表达 | 第42页 |
| 3.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第43-48页 |
| 3.3.1 重组菌BL21-pET28a-cdE的定点突变 | 第43-46页 |
| 3.3.2 突变体对水解水合功能的影响 | 第46-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 重组菌BL21-pET28a-cdE对氰化物的代谢特性 | 第49-62页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 菌种与培养基 | 第49页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 4.2.1 氰根离子浓度的测定 | 第50页 |
| 4.2.2 生物量的测定 | 第50页 |
| 4.2.3 氰化钾作为唯一碳源或氮源的考察 | 第50页 |
| 4.2.4 不同类型氰化物作为唯一碳源或氮源考察 | 第50-51页 |
| 4.2.5 反应pH和温度对重组菌BL21-pET28a-cdE的降氰影响 | 第51页 |
| 4.2.6 重组菌BL21-pET28a-cdE对不同浓度底物的降氰进程 | 第51页 |
| 4.2.7 苯酚对重组菌BL21-pET28a-cdE的降氰影响 | 第51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-61页 |
| 4.3.1 KCN作为唯一碳氮源 | 第51-53页 |
| 4.3.2 添加不同状态的菌体对氰化物的代谢考察 | 第53-54页 |
| 4.3.3 其他氰化物作为唯一碳氮源 | 第54-55页 |
| 4.3.4 混合氰化物作为唯一碳氮源 | 第55-57页 |
| 4.3.5 重组菌BL21-pET28a-cdE表达降氰酶 | 第57页 |
| 4.3.6 反应pH和温度对重组菌BL21-pET28a-cdE的降氰影响 | 第57-59页 |
| 4.3.7 重组菌BL21-pET28a-cdE对不同浓度底物的降氰进程 | 第59-60页 |
| 4.3.8 苯酚对重组菌BL21-pET28a-cdE的降氰影响 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 全文总结 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第77页 |
