| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.脂肪干细胞的分离鉴定与培养 | 第13-17页 |
| 1.1 脂肪干细胞来源 | 第13-14页 |
| 1.2 脂肪干细胞分离方法进展 | 第14-15页 |
| 1.3 脂肪干细胞鉴定 | 第15页 |
| 1.4 脂肪干细胞多向分化 | 第15-17页 |
| 1.4.1 成脂分化 | 第15-16页 |
| 1.4.2 成骨分化 | 第16页 |
| 1.4.3 成软骨分化 | 第16页 |
| 1.4.4 成神经细胞分化 | 第16-17页 |
| 2.低氧对ASCs生物学特性的影响 | 第17-19页 |
| 2.1 短期低氧暴露 | 第17页 |
| 2.2 长期低氧暴露 | 第17-18页 |
| 2.3 低氧下HIF通路与MSCs | 第18-19页 |
| 3.脂肪干细胞运用 | 第19-21页 |
| 3.1 低氧预处理ASCs与细胞治疗 | 第19页 |
| 3.2 ASCs与iPSCs | 第19-20页 |
| 3.3 ASCs与体细胞核移植 | 第20-21页 |
| 4.研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 水牛脂肪干细胞分离培养与低氧分压对其增殖的影响 | 第22-39页 |
| 1 材料与方法 | 第23-30页 |
| 1.1 试验材料 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 试剂配置 | 第23-24页 |
| 1.4 试验仪器 | 第24页 |
| 1.5 不同浓度Ⅰ型胶原酶分离bASCs | 第24-25页 |
| 1.6 bASCs传代培养 | 第25页 |
| 1.7 bASCs冻存复苏 | 第25页 |
| 1.8 不同浓度Ⅰ型胶原酶分离bASCs形态观察及生长特性 | 第25-26页 |
| 1.8.1 bASCs形态观察 | 第25页 |
| 1.8.2 bASCs细胞生长曲线绘制 | 第25-26页 |
| 1.8.3 bASCs细胞群体倍增时间计算 | 第26页 |
| 1.9 常氧与低氧对bASCs生长特性的影响比较 | 第26-30页 |
| 1.9.1 bASCs形态观察 | 第26页 |
| 1.9.2 bASCs细胞生长曲线绘制 | 第26页 |
| 1.9.3 bASCs细胞群体倍增时间计算 | 第26页 |
| 1.9.4 bASCs细胞集落形成试验 | 第26-27页 |
| 1.9.5 常氧与低氧环境下bASCs增殖相关基因qRT-PCR检测 | 第27-29页 |
| 1.9.5.1 细胞总RNA提取 | 第27页 |
| 1.9.5.2 cDNA制备 | 第27-28页 |
| 1.9.5.3 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 1.9.6 bASCs分泌bFGF、VEGF酶联免疫吸附测定 | 第29-30页 |
| 1.10 数据分析 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-37页 |
| 2.1 不同浓度Ⅰ型胶原酶分离bASCs比较 | 第30-32页 |
| 2.2 低氧分压对bASCs增殖的影响 | 第32-35页 |
| 2.3 低氧分压对增殖、凋亡相关基因表达和生长因子分泌的影响 | 第35-37页 |
| 3 分析与讨论 | 第37-38页 |
| 4 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 低氧下HIF-1α与bFGF、VEGF互作影响水牛脂肪干细胞增殖的研究 | 第39-51页 |
| 1 材料与方法 | 第40-44页 |
| 1.1 试验材料 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 试剂配制 | 第40页 |
| 1.4 试验仪器 | 第40-41页 |
| 1.5 低氧下抑制bFGF相关通路对bASCs生物学特性的影响 | 第41-42页 |
| 1.5.1 抑制剂U0126、LY294002浓度摸索 | 第41页 |
| 1.5.2 低氧下抑制bFGF相关通路对bASCs增殖的影响 | 第41页 |
| 1.5.3 低氧下抑制bFGF通路对HIF-1α、 VEGF表达量的影响 | 第41页 |
| 1.5.4 低氧下抑制bFGF通路对bASCs分泌VEGF、bFGF的影响 | 第41-42页 |
| 1.6 低氧下抑制HIF-1α对bASCs生物学特性的影响 | 第42-43页 |
| 1.6.1 抑制剂YC-1浓度摸索 | 第42页 |
| 1.6.2 低氧下抑制HIF-1α对bASCs增殖的影响 | 第42页 |
| 1.6.3 低氧下抑制HIF-1α对bFGF、VEGF和HIF-1α表达量的影响 | 第42-43页 |
| 1.6.4 低氧下抑制HIF-1α对bASCs分泌VEGF、bFGF的影响 | 第43页 |
| 1.7 HIF-1α与bFGF、VEGF互作关系探索 | 第43-44页 |
| 1.7.1 bFGF、VEGF浓度摸索 | 第43页 |
| 1.7.2 低氧下bFGF、VEGF对bASCs增殖的影响 | 第43页 |
| 1.7.3 低氧下添加bFGF和VEGF对HIF-Iα表达量的影响 | 第43页 |
| 1.7.4 低氧下抑制HIF-1α并添加bFGF、VEGF对bASCs增殖的影响 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-48页 |
| 2.1 低氧下抑制bFGF通路对bASCs增殖和HIF-1α的影响 | 第44-45页 |
| 2.2 HIF-1α与bFGF、VEGF互作关系探索 | 第45-47页 |
| 2.3 低氧下抑制HIF-1α对bASCs增殖和bFGF、VEGF分泌的影响 | 第47-48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 低氧分压对水牛脂肪干细胞多能性维持的影响 | 第51-66页 |
| 1 材料与方法 | 第51-57页 |
| 1.1 试验材料 | 第51-52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 1.3 试剂配制 | 第52页 |
| 1.4 试验仪器 | 第52-53页 |
| 1.5 低氧分压对bASCs多能性的影响 | 第53-55页 |
| 1.5.1 RT-PCR检测多能性标志基因和MSCs标志基因在bASCs中的表达 | 第53-54页 |
| 1.5.2 细胞免疫荧光染色检测多能性和MSCs标志基因在bASCs中的表达 | 第54页 |
| 1.5.3 qRT-PCR检测多能因子相对表达量 | 第54-55页 |
| 1.6 常氧与低氧下bASCs多向诱导分化及其鉴定 | 第55-57页 |
| 1.6.1 常氧与低氧下bASCs成脂诱导分化及其鉴定 | 第55页 |
| 1.6.2 常氧与低氧下bASCs成骨诱导分化及其鉴定 | 第55-56页 |
| 1.6.3 常氧与低氧下bASCs成软骨诱导分化及其鉴定 | 第56页 |
| 1.6.4 常氧与低氧下bASCs成神经细胞诱导分化及其鉴定 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-63页 |
| 2.1 低氧分压对bASCs多能性及MSCs标志基因表达的影响 | 第57-59页 |
| 2.2 常氧、低氧下bASCs多向诱导分化及比较 | 第59-63页 |
| 3 分析与讨论 | 第63-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
