| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1. 引言 | 第12-23页 |
| 1.1. BHV-1概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1. BHV-1病原学 | 第12-13页 |
| 1.1.2. BHV-1的致病特征 | 第13页 |
| 1.1.3. 我国近年BHV-1的流行现状 | 第13-14页 |
| 1.1.4. 防控策略 | 第14-15页 |
| 1.2. TLR概述 | 第15-21页 |
| 1.2.1. TLR的发现 | 第15页 |
| 1.2.2. TLR的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3. TLR的分布和对配体的识别 | 第16-17页 |
| 1.2.4. TLR的信号传导通路 | 第17-19页 |
| 1.2.5. TLR在抗病毒天然免疫中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.6. TLR在获得性免疫中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3. 研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 2. BHV-1在MDBK细胞中的增殖规律 | 第23-31页 |
| 2.1. 材料 | 第23页 |
| 2.1.1. 毒株和细胞株 | 第23页 |
| 2.1.2. 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3. 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2. 方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1. 病毒的复苏 | 第23-24页 |
| 2.2.2. TCID_(50)的测定 | 第24页 |
| 2.2.3. 接毒与收毒 | 第24页 |
| 2.2.4. 引物与探针的合成 | 第24页 |
| 2.2.5. 阳性标准品的制备 | 第24页 |
| 2.2.6. BHV-1定量PCR标准曲线的建立 | 第24-25页 |
| 2.2.7. BHV-1增殖规律的研究 | 第25页 |
| 2.2.8. 细胞病变的观察 | 第25页 |
| 2.3. 结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1. 病毒的培养 | 第25页 |
| 2.3.2. TCID_(50)的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.3. 普通PCR结果和测序分析 | 第26页 |
| 2.3.4. BHV-1 TaqMan荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第26-27页 |
| 2.3.5. BHV-1在MDBK细胞中的增殖规律 | 第27-28页 |
| 2.3.6. BHV-1在MDBK细胞中各时间点CPE情况 | 第28-29页 |
| 2.4. 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5. 小结 | 第30-31页 |
| 3. BHV-1感染MDM后其TLR2和TLR9 mRNA的变化规律 | 第31-43页 |
| 3.1. 材料 | 第31页 |
| 3.1.1. 细胞和毒株 | 第31页 |
| 3.1.2. 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.3. 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2. 方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1. 牛单核巨噬细胞的分离培养 | 第31-32页 |
| 3.2.2. 总RNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.3. TLR2、TLR9和β-actin阳性标准品的制备 | 第32-34页 |
| 3.2.4. 定量PCR标准曲线绘制 | 第34页 |
| 3.2.5. 病毒感染MDM细胞 | 第34页 |
| 3.2.6. 目的基因mRNA表达量的检测 | 第34页 |
| 3.2.7. 数据统计分析 | 第34页 |
| 3.3. 结果 | 第34-40页 |
| 3.3.1. 牛单核巨噬细胞培养结果 | 第34-35页 |
| 3.3.2. TLR2、TLR9和β-actin的定量标准曲线 | 第35-39页 |
| 3.3.3. TLR2和TLR9 mRNA表达水平的变化 | 第39-40页 |
| 3.4. 讨论 | 第40-42页 |
| 3.5. 小结 | 第42-43页 |
| 4. Western Blot检测MDM感染BHV-1后其TLR2蛋白的变化规律 | 第43-48页 |
| 4.1. 材料 | 第43页 |
| 4.1.1. 细胞和毒株 | 第43页 |
| 4.1.2. 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3. 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2. 方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1. 牛单核巨噬细胞的分离培养 | 第43页 |
| 4.2.2. 细胞感染病毒 | 第43页 |
| 4.2.3. 蛋白样品的制备 | 第43-44页 |
| 4.2.4. 浓度的测定 | 第44页 |
| 4.2.5. SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| 4.2.6. 转膜 | 第44-45页 |
| 4.2.7. 抗体孵育 | 第45页 |
| 4.2.8. 变化规律的描述 | 第45页 |
| 4.2.9. 数据的分析 | 第45页 |
| 4.3. 结果 | 第45-46页 |
| 4.3.1. TLR2和β-actin的Western Blot结果 | 第45-46页 |
| 4.3.2. TLR2蛋白的变化规律曲线 | 第46页 |
| 4.4. 讨论 | 第46-47页 |
| 4.5. 小结 | 第47-48页 |
| 5. 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
