| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·蛋白连接技术 | 第8-11页 |
| ·化学连接法 | 第8-10页 |
| ·酶连接法 | 第10-11页 |
| ·蛋白连接酶Sortase A酶 | 第11-18页 |
| ·Sortase酶家族 | 第11页 |
| ·Sortase A酶 | 第11-12页 |
| ·Sortase A酶作用机制 | 第12-13页 |
| ·Sortase A酶突变研究 | 第13-14页 |
| ·Sortase A酶的应用 | 第14-18页 |
| ·本论文研究内容与意义 | 第18-20页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·质粒和菌株 | 第20页 |
| ·菌种保存 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20页 |
| ·试验药品 | 第20-21页 |
| ·试验仪器 | 第21-22页 |
| ·培养基,抗生素以及常用溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA提取 | 第23页 |
| ·Sortase A目的基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·Sortase A原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·Sortase A重组载体在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第26-27页 |
| ·高活性Sortase A酶基因的获得 | 第27页 |
| ·高活性Sortase A酶重组载体在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第27-28页 |
| ·Sortase A酶的检测和浓缩 | 第28页 |
| ·高效Sortase A酶连接体系的建立及其定向固定化的应用 | 第28-32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-50页 |
| ·Sortase A酶的制备 | 第32-35页 |
| ·Sortase A酶基因的克隆和载体构建 | 第32页 |
| ·Sortase A酶的表达纯化 | 第32-35页 |
| ·高活性Sortase A酶的制备 | 第35-36页 |
| ·高活性Sortase A酶的表达载体的构建 | 第35页 |
| ·高活性Sortase A酶的蛋白纯化 | 第35-36页 |
| ·GFP蛋白的制备 | 第36-37页 |
| ·高效蛋白质连接体系的建立 | 第37-43页 |
| ·蛋白质的定向固定化应用 | 第43-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 5 展望 | 第51-52页 |
| 6 参考文献 | 第52-61页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第61-62页 |
| 8 致谢 | 第62-63页 |
| 9 附录 | 第63-64页 |
