| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-31页 |
| ·3-HP简介 | 第21-22页 |
| ·3-HP的合成方法 | 第22-23页 |
| ·化学合成 | 第22页 |
| ·生物合成法 | 第22-23页 |
| ·涉及3-HP的微生物代谢作用 | 第22页 |
| ·3-HP的生物合成途径 | 第22-23页 |
| ·K.pneumoniae与E.coli | 第23-24页 |
| ·混菌体系概述 | 第24-25页 |
| ·RNA聚合酶在转录调控方面的研究 | 第25-26页 |
| ·RNA聚合酶概述 | 第25-26页 |
| ·转录调控元件的研究 | 第26页 |
| ·基于σ因子转录调控在改进细胞表型方面的研究 | 第26页 |
| ·代谢调控概述 | 第26-27页 |
| ·合成生物学方法 | 第27页 |
| ·基因敲除技术 | 第27-29页 |
| ·RecA系统 | 第28页 |
| ·Red重组系统 | 第28页 |
| ·ZFN技术和TALEN技术 | 第28页 |
| ·CRISPR技术 | 第28-29页 |
| ·立项意义 | 第29-31页 |
| 第二章 基于σ因子转录调控在改进细胞表型方面的研究 | 第31-49页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·菌株、培养基和培养条件 | 第31-32页 |
| ·基因和重组质粒 | 第32页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·重组菌的构建 | 第33-36页 |
| ·基因组的提取 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·PCR反应体系及其产物的回收 | 第34页 |
| ·切胶回收 | 第34-35页 |
| ·双酶切反应和DNA连接反应 | 第35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·热转化法 | 第35-36页 |
| ·电转化法 | 第36页 |
| ·绿色荧光蛋白分析 | 第36页 |
| ·制样 | 第36页 |
| ·流式细胞仪使用方法 | 第36页 |
| ·酶活分析 | 第36-37页 |
| ·摇瓶和上罐发酵 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| ·蛋白电泳的制样 | 第37页 |
| ·浓缩胶和分离胶的制备 | 第37-38页 |
| ·染色液和脱色液的制备 | 第38页 |
| ·代谢物分析方法 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-47页 |
| ·K.pneumoniae基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·GFP、Pkana、rpoE、rpoS、dksA及ald4基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·GFP、Pkana、rpoE、rpoS、dksA及ald4基因的连接转化 | 第40-41页 |
| ·流式细胞仪检测GFP表达量 | 第41-42页 |
| ·重组菌的ALD4酶活分析 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·摇瓶发酵分析 | 第44-46页 |
| ·K.pneumoniae(pET-pk-ald4-pkana-rpoE)上罐发酵的研究 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌的共培养研究 | 第49-59页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·菌株、培养基和培养条件 | 第49-50页 |
| ·基因和重组质粒 | 第50页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-54页 |
| ·重组菌的构建 | 第50-53页 |
| ·质粒的提取 | 第51页 |
| ·cm基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·cm基因的切胶回收 | 第52页 |
| ·pET-cm载体的酶切连接反应 | 第52页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第52页 |
| ·载体pET-cm的热转化 | 第52-53页 |
| ·载体pET-28a的电转化 | 第53页 |
| ·重组工程菌的培养 | 第53页 |
| ·分析测定 | 第53-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-57页 |
| ·工程菌E.coli(pET-cm)和K.pneumoniae(pET-28a)的构建 | 第54页 |
| ·共培养和单独培养菌体生物量的分析 | 第54-55页 |
| ·菌落数的测定 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 肺炎克雷伯氏杆菌中3-羟基丙酸代谢分向的研究 | 第59-77页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·菌株、培养基和培养条件 | 第59-60页 |
| ·基因和重组质粒 | 第60页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-66页 |
| ·RecA重组系统 | 第61-62页 |
| ·八个单敲除载体和菌株的构建 | 第62-64页 |
| ·基因组模板的提取 | 第62页 |
| ·pET-cm质粒的提取 | 第62页 |
| ·同源臂基因序列的PCR反应体系及其产物回收 | 第62-63页 |
| ·同源臂基因序列切胶回收 | 第63页 |
| ·双酶切反应和DNA连接反应 | 第63页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第63-64页 |
| ·热转化法 | 第64页 |
| ·敲除质粒的电转化法 | 第64页 |
| ·单基因敲除与双基因敲除 | 第64页 |
| ·单基因敲除 | 第64页 |
| ·双基因敲除 | 第64页 |
| ·摇瓶和上罐发酵 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第65-66页 |
| ·蛋白电泳的制样 | 第65页 |
| ·浓缩胶和分离胶的制备 | 第65-66页 |
| ·染色液和脱色液的制备 | 第66页 |
| ·代谢物分析方法 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-76页 |
| ·八个单基因敲除菌和K.pneumoniae(tac-puuc-△adhP-△pflB)的构建 | 第66-69页 |
| ·单基因敲除菌的摇瓶发酵分析 | 第69-71页 |
| ·K.pneumoniae △adhP△pflB(tac-puuC)的摇瓶发酵分析 | 第71-74页 |
| ·K.pneumoniae △adhP△pflB(tac-puuC)的上罐发酵分析 | 第74-75页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第75-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章 总结与展望 | 第77-79页 |
| ·总结 | 第77页 |
| ·创新点 | 第77-78页 |
| ·展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 附录 | 第83-85页 |
| 附录1 本研究用到的试剂 | 第83-84页 |
| 附录2 本研究所用到的仪器 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 导师和作者简介 | 第87-89页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第89-90页 |
| 北京化工大学专业学位硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第90-91页 |
