| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 引言 | 第11页 |
| ·牛疱疹病毒5型（BoHV-5）的流行特性以及分子特性 | 第11-12页 |
| ·miRNA的生成机制及功能 | 第12-13页 |
| ·疱疹病毒表达的miRNA | 第13-14页 |
| ·miRNA的功能研究 | 第14-15页 |
| ·miRNA诱饵 | 第15-17页 |
| ·四环素诱导系统 | 第17-18页 |
| ·研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-35页 |
| ·实验材料 | 第19-24页 |
| ·载体、质粒、病毒、细胞、菌种及实验动物 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要溶液及培养基的配制 | 第20-23页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-35页 |
| ·PCR扩增方法 | 第24页 |
| ·DNA纯化分离的方法 | 第24-27页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第27页 |
| ·酶切后连接以及同源重组 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态制备的方法 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·细胞转染 | 第28-29页 |
| ·双荧光素酶报告试验 | 第29-30页 |
| ·RNA的抽提 | 第30页 |
| ·RNA的质量鉴定 | 第30-31页 |
| ·反转录与qPCR | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32-33页 |
| ·病毒滴度（PFU）的测定 | 第33-34页 |
| ·空斑筛选纯化 | 第34页 |
| ·空斑大小比较 | 第34页 |
| ·一步法生长曲线 | 第34-35页 |
| 第3章 实验结果 | 第35-48页 |
| ·miR-B10-3p与病毒自身靶基因UL39的 3’UTR互作验证 | 第35页 |
| ·miRNA报告系统的构建以及功能的验证 | 第35-37页 |
| ·miRNA报告系统的设计 | 第35-36页 |
| ·miRNA报告系统功能的验证 | 第36页 |
| ·miRNA报告系统特异性的验证 | 第36-37页 |
| ·miRNA诱饵系统的构建 | 第37-40页 |
| ·含诱饵系统的重组病毒的构建 | 第40-44页 |
| ·含上下游同源臂的质粒构建 | 第40-41页 |
| ·中间转移质粒的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·同源重组 | 第42页 |
| ·含诱饵系统的重组病毒的纯化以及鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组病毒体外培养生物特性的研究 | 第44-46页 |
| ·空斑大小的比较 | 第44-45页 |
| ·一步法生长曲线 | 第45-46页 |
| ·重组病毒中诱饵系统的功能验证 | 第46-48页 |
| ·检测EGFP的表达量 | 第46-47页 |
| ·TaqMan法绝对定量qPCR检测诱饵系统对miRNA的吸附作用 | 第47-48页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第48-52页 |
| ·关于诱饵系统质粒的构建 | 第48-50页 |
| ·关于构建重组病毒 | 第50页 |
| ·关于病毒miRNA诱饵系统效率的检测 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
