| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-44页 |
| ·细胞穿膜肽研究概况 | 第12-23页 |
| ·细胞穿膜肽的研究原因 | 第12-13页 |
| ·细胞穿膜肽的研究历史 | 第13-14页 |
| ·细胞穿膜肽定义、性质及其分类 | 第14-16页 |
| ·细胞穿膜肽的作用机制 | 第16-20页 |
| ·细胞穿膜肽的应用 | 第20-22页 |
| ·细胞穿膜肽目前存在的问题及展望 | 第22-23页 |
| ·大动物转基因技术研究概况 | 第23-43页 |
| ·大动物转基因的研究原因 | 第23-24页 |
| ·大动物转基因的研究历史 | 第24-26页 |
| ·常用的大动物转基因技术 | 第26-32页 |
| ·标记基因在动物转基因中的研究概况 | 第32-36页 |
| ·大动物转基因新技术 | 第36-42页 |
| ·大动物转基因存在的问题及其展望 | 第42-43页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-59页 |
| ·实验材料 | 第44-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·实验猪和细胞系 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| ·实验试剂配制 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验分析软件 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-59页 |
| ·PCR | 第48-49页 |
| ·DNA寡核苷酸退火 | 第49页 |
| ·PCR、酶切产物回收与连接 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第50页 |
| ·基因组DNA的PCR扩增 | 第50页 |
| ·PTDs-Cre融合重组蛋白的原核表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·蛋白浓度测定(BCA蛋白浓度测定试剂盒) | 第51页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白纯化情况 | 第51页 |
| ·PTDs-Cre蛋白体外活性检测 | 第51-52页 |
| ·报告细胞检测PDTs-Cre蛋白活性实验 | 第52页 |
| ·Alexa 488标记PTD-Cre蛋白实验 | 第52页 |
| ·PTD-Cre蛋白入膜效率实验 | 第52页 |
| ·PTD-Cre-Alexa 488蛋白细胞内共定位实验 | 第52-53页 |
| ·PTD-Cre细胞毒性实验 | 第53页 |
| ·小分子细胞毒性实验 | 第53页 |
| ·标准曲线法测定蛋白在猪原代细胞中的重组效率 | 第53-54页 |
| ·组织和细胞基因组提取 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第55页 |
| ·质粒小量提取 | 第55页 |
| ·去内毒素质粒的大量提取 | 第55-56页 |
| ·电转染猪的成纤维细胞 | 第56-57页 |
| ·脂质体转染293T细胞 | 第57页 |
| ·转染后细胞的筛选 | 第57页 |
| ·核移植与转基因克隆猪的生成 | 第57页 |
| ·Southern blot | 第57-59页 |
| 第三章 CPPs在猪原代细胞中的作用及其标记基因删除猪的制备 | 第59-87页 |
| ·实验结果 | 第59-82页 |
| ·CPP5、R9、TAT-Cre原核载体的构建与鉴定 | 第59-62页 |
| ·CPP5、R9、TAT-Cre三种融合重组蛋白的纯化 | 第62-64页 |
| ·CPP5、R9、TAT-Cre三种融合重组蛋白的体外及其体内细胞活性鉴定 | 第64-70页 |
| ·CPP5、R9、TAT-Cre三种融合重组蛋白在猪原代细胞中的穿膜效率及细胞毒性 | 第70-71页 |
| ·CPP5、R9、TAT三种细胞穿膜肽介导Cre重组酶进入猪原代细胞机制 | 第71-76页 |
| ·CPP5、R9、TAT-Cre三种融合重组蛋白在猪原代细胞中的重组效率 | 第76-77页 |
| ·HA2和喹啉提高TAT-Cre蛋白在猪原代细胞中的重组效率 | 第77页 |
| ·HA2和喹啉的细胞毒性研究 | 第77-80页 |
| ·利用TAT-Cre蛋白制备标记基因删除的基因敲除猪 | 第80-82页 |
| ·结果分析与讨论 | 第82-87页 |
| 第四章 一种简单快速高效制备标记基因自删除和双等位基因敲除猪的方法 | 第87-103页 |
| 引言 | 第87-88页 |
| ·实验结果 | 第88-100页 |
| ·小鼠Oct4基因在猪早期胚胎发育阶段的表达模式研究 | 第88-90页 |
| ·小鼠Oct4启动子在猪早期胚胎发育时期特异启动Cre重组酶 | 第90-92页 |
| ·pSP72-mOCN自剪切元件载体的构建 | 第92-93页 |
| ·pMSTN-mOct4CN基因敲除载体的构建 | 第93-94页 |
| ·猪原代细胞基因打靶及阳性克隆鉴定 | 第94页 |
| ·Oct4-Cre介导的自剪切系统在胎儿水平成功进行标记删除 | 第94-95页 |
| ·Oct4-Cre介导的自剪切系统在猪个体水平成功进行标记删除 | 第95-100页 |
| ·利用Oct4-Cre介导的自剪切系统简单快速的获得标记基因删除的双等位基因敲除猪 | 第100页 |
| ·结果分析与讨论 | 第100-103页 |
| 第五章 结论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 个人简历 | 第122页 |
