| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 引言 | 第15-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-33页 |
| 0 前言 | 第18-19页 |
| 1 脂肪酸去饱和酶的分类 | 第19-20页 |
| 2 脂肪酸去饱和酶的空间构象 | 第20-21页 |
| 3 脂肪酸去饱和酶的研究进展 | 第21-31页 |
| ·Δ6Fad 研究进展 | 第21-29页 |
| ·Δ6Fad 基因的克隆和组织表达 | 第22页 |
| ·Δ6Fad 基因的功能分析 | 第22-23页 |
| ·营养对Δ6Fad 基因表达的影响 | 第23-27页 |
| ·温度对Δ6Fad 基因表达的影响 | 第27页 |
| ·盐度对Δ6Fad 基因表达的影响 | 第27页 |
| ·其他因素对Δ6Fad 基因表达的影响 | 第27-29页 |
| ·Δ5Fad 研究进展 | 第29-30页 |
| ·Δ4Fad 研究进展 | 第30-31页 |
| ·Δ8Fad 研究进展 | 第31页 |
| 4 小结 | 第31-33页 |
| 第二章 皱纹盘鲍Δ5Fad 的全长克隆、序列分析、功能验证和组织表达 | 第33-72页 |
| 0 前言 | 第33-34页 |
| 1 材料与方法 | 第34-49页 |
| ·实验试剂和材料 | 第34-37页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·实验试剂 | 第34-37页 |
| ·实验方法 | 第37-48页 |
| ·Δ5Fad 基因全长克隆 | 第37-42页 |
| ·核心片段克隆 | 第37-40页 |
| ·Trizol 法提取鲍鱼肝胰腺组织 RNA | 第37页 |
| ·简并引物设计 | 第37-38页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第38-39页 |
| ·核心片段 PCR 扩增 | 第39页 |
| ·目的片段 DHA 纯化 | 第39页 |
| ·目的片段连接和转化 | 第39-40页 |
| ·菌落鉴定 | 第40页 |
| ·Δ5Fad 3’ RACE | 第40-41页 |
| ·3’ RACE 特异性引物设计与 cDNA 第一链合成 | 第40-41页 |
| ·3’ RACE PCR 反应 | 第41页 |
| ·Δ5Fad 5’ RACE | 第41-42页 |
| ·5’ RACE特异性引物设计与 cDNA第一链合成 | 第41页 |
| ·5’ RACE PCR 反应 | 第41-42页 |
| ·Δ5Fad 全长序列分析 | 第42页 |
| ·Δ5Fad 功能验证 | 第42-46页 |
| ·Δ5Fad 基因全长高保真扩增 | 第42-43页 |
| ·酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）真核表达载体的构建与检验 | 第43-44页 |
| ·重组表达载体转化酿酒酵母 | 第44-45页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第44页 |
| ·表达质粒转化酵母感受态 | 第44-45页 |
| ·筛选阳性酿酒酵母 | 第45页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第45页 |
| ·脂肪酸测定 | 第45-46页 |
| ·高效气相色谱仪测定脂肪酸 | 第45-46页 |
| ·高效气相质谱联用测定脂肪酸 | 第46页 |
| ·Δ5Fad 的转化效率 | 第46页 |
| ·Δ5Fad 在鲍鱼不同组织中的表达 | 第46-48页 |
| ·鲍鱼不同组织 RNA 提取和第一链 cDNA 合成 | 第46-47页 |
| ·普通 PCR 分析Δ5Fad 在鲍鱼不同组织中的表达 | 第47页 |
| ·2-ΔΔCT分析Δ5Fad 基因表达体系的建立与检测 | 第47-48页 |
| ·内参基因的选择及定量引物的检验 | 第47-48页 |
| ·退火温度及反应体积的筛选 | 第48页 |
| ·2-ΔΔCT分析鲍鱼不同组织的 Hdhfad1 和 Hdhfad2 的相对表达比率 | 第48页 |
| ·统计分析 | 第48-49页 |
| 2 实验结果 | 第49-69页 |
| ·Δ5Fad 基因全长克隆 | 第49-50页 |
| ·鲍鱼肝胰腺组织总 RNA 质量检验 | 第49页 |
| ·Δ5Fad 基因核心片段、RACE 扩增结果 | 第49-50页 |
| ·Δ5Fad 基因全长序列分析 | 第50-57页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 全长 cDNA 序列分析 | 第50页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 编码区氨基酸一级结构分析 | 第50-51页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 编码区氨基酸二级结构分析 | 第51-52页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 编码区氨基酸亲疏水性和跨膜区分析 | 第52-54页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 与其他动物Δ5Fad 的编码区氨基酸多序列比对 | 第54-55页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 与其他动物△5Fad 编码区氨基酸同源性分析 | 第55页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 与其他动物 Fad 编码区氨基酸进化树分析 | 第55-57页 |
| ·Δ5Fad 基因功能验证 | 第57-64页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 cDNA 全长扩增 | 第57页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 表达载体的构建与检验 | 第57-59页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 功能验证结果 | 第59-64页 |
| ·气相色谱检测脂肪酸结果 | 第59-60页 |
| ·气相质谱联用检测脂肪酸结果 | 第60页 |
| ·HdhFad1 和 HdhFad2 转化效率 | 第60-64页 |
| ·相对定量分析Δ5Fad 基因的组织表达 | 第64-69页 |
| ·相对定量表达体系的建立和检验 | 第64-68页 |
| ·引物特异性验证 | 第64-65页 |
| ·目的基因与内参基因的扩增效率 E 验证 | 第65-66页 |
| ·退火温度与反应体积的确定 | 第66-67页 |
| ·SYBR Green Ⅰ定量 PCR 反应扩增曲线 | 第67-68页 |
| ·Hdhfad1 和 Hdhfad2 在不同组织中的表达 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 第三章 饲料中不同脂肪源对稚鲍生长、脂肪酸合成能力以及Δ5Fad 基因表达的影响 | 第72-88页 |
| 0 前言 | 第72-73页 |
| 1 材料与方法 | 第73-77页 |
| ·实验饲料 | 第73-75页 |
| ·实验动物及管理 | 第75-76页 |
| ·样品的采集和处理 | 第76页 |
| ·样品分析 | 第76-77页 |
| ·生长指标的测定 | 第76页 |
| ·脂肪和脂肪酸含量的测定 | 第76页 |
| ·Δ5Fad 基因表达量的分析 | 第76-77页 |
| ·统计分析 | 第77页 |
| 2 结果 | 第77-84页 |
| ·饲料中不同脂肪源对皱纹盘鲍稚鲍生长以及存活的影响 | 第77-78页 |
| ·饲料中不同脂肪源对稚鲍脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第78-82页 |
| ·饲料中不同脂肪源对皱纹盘鲍稚鲍Δ5Fad 表达的影响 | 第82-84页 |
| ·不同脂肪源饲料对稚鲍内参基因表达量的影响 | 第82-83页 |
| ·不同脂肪源饲料对稚鲍Δ5Fad 表达量的影响 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-87页 |
| 4 小结 | 第87-88页 |
| 第四章 不同梯度的植物油对鲍鱼生长、脂肪酸合成能力以及Δ5Fad 基因表达的影响 | 第88-118页 |
| 0 前言 | 第88-89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-93页 |
| ·实验饲料 | 第89-91页 |
| ·实验动物及管理 | 第91页 |
| ·样品采集 | 第91-92页 |
| ·样品分析 | 第92页 |
| ·生长指标的测定 | 第92页 |
| ·脂肪和脂肪酸成分分析 | 第92页 |
| ·Δ5Fad 基因表达量的分析 | 第92页 |
| ·统计分析 | 第92-93页 |
| 2 结果 | 第93-114页 |
| ·不同梯度植物油饲料对皱纹盘鲍稚鲍生长以及存活的影响 | 第93-96页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍生长以及存活的影响 | 第93页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍生长以及存活的影响 | 第93-96页 |
| ·不同梯度植物油饲料对皱纹盘鲍稚鲍脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第96-108页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍肝胰腺脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第96-99页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍肌肉组织脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第99-102页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍肝胰腺组织脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第102-105页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍肌肉组织脂肪和脂肪酸组成的影响 | 第105-108页 |
| ·不同梯度植物油饲料对皱纹盘鲍稚鲍Δ5Fad 表达的影响 | 第108-114页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍Δ5Fad 表达的影响 | 第108-111页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍内参基因表达量的影响 | 第108-109页 |
| ·GO 梯度添加饲料对稚鲍Δ5Fad 表达量的影响 | 第109-111页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍Δ5Fad 表达的影响 | 第111-114页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍内参基因表达量的影响 | 第111-112页 |
| ·LO 梯度添加饲料对稚鲍Δ5Fad 表达量的影响 | 第112-114页 |
| 3 讨论 | 第114-117页 |
| 4 小结 | 第117-118页 |
| 第五章 全文总结 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-136页 |
| 附录 | 第136-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 个人简历 | 第141-142页 |
| 研究成果 | 第142-143页 |
