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凡纳滨对虾抗脂多糖因子ALF-AVK基因的克隆及其特性研究

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 文献综述第13-34页
   ·前言第13-14页
   ·无脊椎动物的免疫系统第14-23页
     ·细胞免疫第14-15页
     ·体液免疫第15-23页
   ·抗脂多糖因子的研究进展第23-27页
     ·抗脂多糖因子的发现及结构分析第23-24页
     ·抗脂多糖因子在甲壳动物中研究现状第24-26页
     ·研究抗脂多糖因子的意义及其应用前景第26-27页
   ·水产养殖对虾的重要病害第27-29页
     ·对虾白斑症病毒病第27页
     ·桃拉综合症病毒病第27-28页
     ·鳗弧菌诱发的对虾疾病第28-29页
   ·分子生物学在研究中的应用第29-33页
     ·实时荧光定量PCR技术分析基因转录变化第29-30页
     ·体外重组表达功能基因蛋白的功能验证第30-31页
     ·cDNA文库构建及分析第31页
     ·RACE全长扩增技术第31-33页
   ·本论文研究的目的及意义第33-34页
第二章 凡纳滨对虾血细胞ALF-AVK基因的克隆及序列分析第34-49页
   ·凡纳滨对虾ALF-AVK基因的克隆第34-48页
     ·实验材料与仪器第34页
     ·实验方法第34-41页
     ·实验结果第41-47页
     ·讨论第47-48页
 小结第48-49页
第三章 凡纳滨对虾ALF-AVK基因的表达差异研究第49-58页
   ·实验材料及仪器第49页
   ·实验方法第49-53页
     ·健康凡纳滨对虾不同组织总RNA抽提第49-50页
     ·感染WSSV和鳗弧菌后凡纳滨对虾鳃组织RNA抽提第50-51页
     ·实时荧光定量PCR分析ALF-AVK基因不同组织和WSSV及鳗弧菌感染后差异表达情况第51-52页
     ·Dot blotting 检测凡纳滨对虾 WSSV 感染情况第52-53页
   ·实验结果第53-55页
     ·凡纳滨对虾ALF-AVK基因mRNA的组织差异表达特征第53-54页
     ·注射感染鳗弧菌或WSSV后凡纳滨对虾ALF-AVK基因mRNA表达水平在血细胞中的变化情况第54页
     ·Dot-blot法检测凡纳滨对虾注射WSSV后感染情况检测第54-55页
   ·讨论第55-57页
 小结第57-58页
第四章 凡纳滨对虾ALF-AVK蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备研究第58-78页
   ·凡纳滨对虾ALF-AVK蛋白的原核表达及纯化第58-69页
     ·实验试剂及仪器第58-60页
     ·实验方法第60-66页
     ·实验结果第66-68页
     ·讨论第68-69页
   ·重组蛋白rALF-AVK鼠源多克隆抗体的制备第69-72页
     ·实验材料与仪器第69-70页
     ·实验方法第70-71页
     ·实验结果第71页
     ·讨论第71-72页
   ·免疫印迹法(Westernblotting)检测ALF-AVK重组蛋白以及血细胞中ALF蛋白第72-77页
     ·实验试剂及仪器第72-73页
     ·实验方法第73-74页
     ·实验结果第74-76页
     ·讨论第76-77页
 小结第77-78页
第五章 凡纳滨对虾ALF-AVK重组蛋白的活性研究第78-85页
   ·实验方法第78-79页
     ·间接ELISA检测rALF-AVK与LPS的结合试验第78页
     ·鳗弧菌与rALF-AVK结合实验第78-79页
     ·凡纳滨对虾体内检测重组蛋白ALF-AVK的结合活性第79页
   ·实验结果第79-82页
     ·ALF-AVK重组蛋白与LPS结合活性检测第79-80页
     ·细菌-蛋白结合沉淀实验第80-81页
     ·ALF-AVK重组蛋白与鳗弧菌中和实验第81-82页
   ·讨论第82-84页
 小结第84-85页
第六章 免疫组化法研究凡纳滨对虾抗脂多糖因子ALF的组织分布特点第85-93页
   ·实验试剂及仪器第85-86页
   ·实验方法第86-88页
     ·处理防脱载玻片第86页
     ·实验动物的组织固定第86页
     ·石蜡处理及组织包埋第86-87页
     ·修正组织蜡块及切片第87页
     ·组织脱蜡复水第87页
     ·组织抗原热修复反应及内源酶的清除第87-88页
     ·背景封闭及抗原抗体反应第88页
     ·衬染及封片第88页
   ·实验结果第88-91页
   ·讨论第91-92页
 小结第92-93页
总结第93-95页
参考文献第95-107页
致谢第107-108页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第108-109页

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