| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·家蚕病毒病 | 第14-15页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒研究进展 | 第15-19页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒流行性分析 | 第15-16页 |
| ·家蚕抗传染性软化病病毒的研究 | 第16页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒的分离及病毒病毒粒子特性 | 第16-17页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒的结构蛋白研究 | 第17页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒的基因组研究 | 第17-18页 |
| ·家蚕传染性软化病病毒的分类学地位 | 第18-19页 |
| ·真核生物mRNA及小RNA病毒的翻译起始机制 | 第19-26页 |
| ·真核生物mRNA的翻译起始机制 | 第19-20页 |
| ·小RNA病毒的翻译起始机制 | 第20-25页 |
| ·内部核糖体进入位点功能的种属特异性研究 | 第25-26页 |
| ·研究意义和目标 | 第26-29页 |
| 第二章 荧光蛋白系统验证BmIFV的5’端IRES功能 | 第29-49页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·生物材料 | 第29-30页 |
| ·主要仪器及设备 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·BmIFV的繁殖与纯化方法 | 第30-31页 |
| ·病毒RNA的抽提方法 | 第31-32页 |
| ·BmIFV 5’端二级结构的分析方法 | 第32页 |
| ·BmIFV的5’端片段扩增 | 第32页 |
| ·双荧光蛋白杆状病毒表达系统供体质粒的构建方法 | 第32-34页 |
| ·重组Bacmid的获得、菌液鉴定及Bacmid的抽提方法 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒的获得及病毒滴度的测定方法 | 第35-36页 |
| ·相同滴度的不同重组病毒侵染BmN细胞系及荧光显微观察 | 第36页 |
| ·荧光蛋白的Western blotting分析 | 第36-37页 |
| ·荧光蛋白的实时定量分析(Q-PCR) | 第37-39页 |
| ·实验结果 | 第39-47页 |
| ·BmIFV 5’端二级结构的分析结果 | 第39-40页 |
| ·BmIFV 5’端序列的PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| ·双荧光蛋白杆状病毒表达系统供体质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·重组Bacmid的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组病毒的获得及病毒滴度的统一 | 第43页 |
| ·重组病毒侵染BmN细胞及荧光观察结果 | 第43-46页 |
| ·重组病毒侵染BmN细胞的Western blotting分析 | 第46页 |
| ·重组病毒侵染BmN细胞的Q-PCR分析 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 荧光素酶系统检测BmIFV的IRES活性 | 第49-58页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·生物材料 | 第49页 |
| ·主要仪器及设备 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·病毒的繁殖与纯化方法 | 第50页 |
| ·病毒RNA的抽提方法 | 第50页 |
| ·BmIFV 5’端片段的扩增 | 第50页 |
| ·双荧光素酶杆状病毒表达系统供体质粒的构建方法 | 第50-52页 |
| ·重组杆状病毒的获得及滴度测定方法 | 第52页 |
| ·相同滴度的不同重组病毒侵染BmN细胞系 | 第52页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统的检测方法 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-56页 |
| ·荧光素酶基因的PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·脑心炎病毒IRES序列的PCR扩增 | 第53页 |
| ·双荧光素酶杆状病毒表达系统供体质粒的构建结果 | 第53-54页 |
| ·重组病毒的获得及病毒滴度的统一 | 第54-55页 |
| ·组重组病毒侵染细胞与荧光素酶的检测 | 第55-56页 |
| ·不同片段长度二级结构的生物信息学分析 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 家蚕传染性软化病毒的IRES的种属特异性分析 | 第58-67页 |
| ·材料与试剂 | 第58-59页 |
| ·生物材料 | 第58页 |
| ·主要仪器及设备 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-63页 |
| ·重组病毒侵染四种细胞系及荧光显微镜观察 | 第59页 |
| ·重组病毒侵染四种细胞系的Western blotting分析方法 | 第59-60页 |
| ·DIG标记的EGFP和DsRed探针的合成及纯化方法 | 第60-61页 |
| ·四种细胞系的RNA Dot Blotting分析方法 | 第61-63页 |
| ·实验结果 | 第63-65页 |
| ·重组病毒侵染四种细胞的荧光显微镜观察结果 | 第63页 |
| ·重组病毒侵染四种细胞系的Western blotting结果 | 第63页 |
| ·重组病毒侵染四种细胞系的RNA Dot blotting结果 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 家蚕传染性软化病毒的IRES的组织特异性分析 | 第67-73页 |
| ·材料与试剂 | 第67页 |
| ·生物材料 | 第67页 |
| ·仪器设备 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·重组病毒侵染家蚕及荧光观察 | 第68页 |
| ·重组病毒侵染的家蚕的四种组织的Western blotting分析 | 第68页 |
| ·重组病毒侵染的家蚕的四种组织的Q-PCR分析 | 第68-69页 |
| ·实验结果 | 第69-71页 |
| ·重组病毒侵染家蚕及荧光观察 | 第69-70页 |
| ·重组病毒侵染的家蚕的四种组织的Western blotting结果 | 第70-71页 |
| ·重组病毒侵染的家蚕四种组织的Q-PCR结果 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 RNAi对BmIFV IRES的抑制作用初探 | 第73-84页 |
| ·材料与试剂 | 第73-74页 |
| ·生物材料 | 第73-74页 |
| ·仪器设备 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·Stealth RNAi~(TM) siRNA的设计 | 第74页 |
| ·Stealth RNAi~(TM) siRNA的稀释 | 第74-75页 |
| ·Stealth RNAi~(TM) siRNA瞬时转染BmN细胞 | 第75页 |
| ·重组病毒侵染含有siRNA的BmN细胞系及荧光素酶系统的检测 | 第75页 |
| ·pig-le-neo载体的构建 | 第75-76页 |
| ·shRNA的设计和shRNA载体的构建 | 第76页 |
| ·含shRNA转基因细胞的构建 | 第76-77页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第77-78页 |
| ·实验结果 | 第78-82页 |
| ·合成的Stealth RNAi~(TM) siRNA | 第78页 |
| ·重组病毒侵染的瞬转siRNA的BmN细胞的荧光素酶结果 | 第78-79页 |
| ·构建的shRNA-Loop15载体的鉴定 | 第79-81页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 结论、创新点及展望 | 第84-86页 |
| ·主要结论 | 第84-85页 |
| ·创新点 | 第85页 |
| ·展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 附录缩略词 | 第96-98页 |
| 附图A BmIFV 5’端1-155nt二级结构的预测 | 第98-99页 |
| 附图B BmIFV 5’端1-311nt二级结构的预测 | 第99-100页 |
| 附图C BmIFV 5’端1-323nt二级结构的预测 | 第100-101页 |
| 附图D BmIFV 5’端1-383nt二级结构的预测 | 第101-102页 |
| 附图E BmIFV 5’端1-551nt二级结构的预测 | 第102-103页 |
| 附图F 转基因质粒pig-shRNA-Loop15-neo质粒的构建 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
