| Acknowledgements | 第1-21页 |
| Abstract | 第21-23页 |
| 摘要 | 第23-26页 |
| Chapter 1 Introduction | 第26-33页 |
| ·General introduction | 第26-29页 |
| ·Statement of the problems | 第29-30页 |
| ·Hypothesis | 第30页 |
| ·Objectives | 第30页 |
| ·References | 第30-33页 |
| Chapter 2 Literature review | 第33-63页 |
| ·RNA interference (RNAi) | 第33-42页 |
| ·Discovery of RNAi | 第33页 |
| ·RNA interference mechanism | 第33-35页 |
| ·Vector based RNA interference | 第35-37页 |
| ·The BmNPV genome | 第37-40页 |
| ·Baculovirus DNA replication | 第40页 |
| ·Gene involved in Baculovirus DNA replication | 第40-42页 |
| ·p143 Gene | 第41-42页 |
| ·p35 Gene | 第42页 |
| ·Classical swine fever virus | 第42-45页 |
| ·Etiology and Epidemiology | 第42-43页 |
| ·CSFV genome | 第43页 |
| ·Structure of E2 glycoprotein | 第43-44页 |
| ·Virus characterization | 第44页 |
| ·Control of the diseases | 第44-45页 |
| ·Baculovirus expression system | 第45-52页 |
| ·Biological characteristics of a baculovirus | 第45页 |
| ·Bac-to-Bac baculovirus expression system | 第45-48页 |
| ·Silkworm of BmNPV/Bac-to-Bac baculovirus expression system | 第48-50页 |
| ·Silkworm of BmNPV/Bac-to-Bac baculovirus expression system application | 第50-52页 |
| ·References | 第52-63页 |
| Chapter 3 Short hairpin RNA expression for enhancing the resistance of Bombyx mori(Bm) to nucleopolyhedrovirus in vitro and in vivo | 第63-80页 |
| ·Abstract | 第63页 |
| ·Introduction | 第63-65页 |
| ·Material and methods | 第65-71页 |
| ·Cell lines | 第65页 |
| ·Virus | 第65页 |
| ·Experimental animals | 第65页 |
| ·Chemistry reagents | 第65-66页 |
| ·Construction of shRNA-expression plasmid | 第66-68页 |
| ·shRNA oligonucleotide design | 第66页 |
| ·Annealing the oligonucleotides | 第66-67页 |
| ·Construction of recombinant plasmids | 第67-68页 |
| ·Transfection of BmN cells line using short hairpin constructs | 第68-69页 |
| ·RNA extraction and cDNA synthesis from BmN cell | 第69-70页 |
| ·Quantitative analysis | 第70-71页 |
| ·Recombinant shRNA injected in silkworm larvae | 第71页 |
| ·Results | 第71-77页 |
| ·Selection of shRNA and construction of recombinant plasmids | 第71-72页 |
| ·Purification of polyhedra of silkworm | 第72-73页 |
| ·Viral challenge and investigation of interference against BmNPV in vitro | 第73-74页 |
| ·Silkworm larvae challenged by BmNPV | 第74-76页 |
| ·Gene expression analysis | 第76-77页 |
| ·Discussion | 第77-78页 |
| ·References | 第78-80页 |
| Chapter 4 E2 glycoprotein of CSFV expressed in silkworm by improvedBac-to-Bac/BmNPV baculovirus expression system | 第80-109页 |
| ·Abstract | 第80页 |
| ·Introduction | 第80-82页 |
| ·Materials | 第82-85页 |
| ·E2 Gene from CSFV | 第82页 |
| ·Cloning vector | 第82页 |
| ·Using DH5α as a transient host | 第82页 |
| ·Expression host strain | 第82页 |
| ·Restriction endonuclease | 第82页 |
| ·Reagents | 第82-83页 |
| ·Antibiotic, Chromogenic agents | 第83页 |
| ·Silkworm cells line | 第83页 |
| ·Silkworm | 第83页 |
| ·Medium | 第83页 |
| ·SDS PAGE reagents and their preparation | 第83-84页 |
| ·Western blotting | 第84-85页 |
| ·Experimental methods | 第85-99页 |
| ·Outline of experiment | 第85-87页 |
| ·Construction of recombinant donor plasmid pFastBacHTb/E2 | 第85-87页 |
| ·Cloning and expression strategy | 第87页 |
| ·Primer deigned | 第87-88页 |
| ·RNA extraction | 第88页 |
| ·RT-PCR | 第88-89页 |
| ·PCR amplification | 第89-91页 |
| ·Ligation | 第91页 |
| ·Target fragment and cloning vector | 第91页 |
| ·Competent cells preparation for Transformation | 第91-92页 |
| ·Ligated products were transformed in to competent cells of DH5a | 第92页 |
| ·LB plate | 第92-93页 |
| ·IPTG and X-gel | 第93页 |
| ·Recombinant plasmid- positive clone identification | 第93页 |
| ·Recombinant plasmid was transformed into DH10BAC~(TM) E.Coli | 第93页 |
| ·LB agar selective plates for DH10Bac~(TM) transformation | 第93-94页 |
| ·Recombinant plasmid-positive clone identification phenotype | 第94页 |
| ·Recombinant plasmid extraction | 第94-95页 |
| ·Analyzing recombinant bacmid DNA by PCR | 第95-96页 |
| ·PCR Analysis with M13 Primers | 第96-97页 |
| ·Construction of recombinant virus in B. mori cell line | 第97-98页 |
| ·Silkworm | 第98页 |
| ·Expression of E2 glycoprotein gene in silkworm | 第98页 |
| ·SDS- PAGE | 第98-99页 |
| ·Western blotting | 第99页 |
| ·Results | 第99-105页 |
| ·The CSFV E2 gene bioinformatics analysis: | 第99页 |
| ·Synthesis of viral gene E2 from CSFV | 第99-100页 |
| ·Construction of Recombinant pFastBac HTb/E2 | 第100-101页 |
| ·Construction of recombinant rBacmid/BmNPV/E2 | 第101-102页 |
| ·Construction of recombinant BmNPV/E2 baculovirus | 第102-103页 |
| ·Expression of E2 gene in silkworm cells and larvae | 第103-105页 |
| ·Discussion | 第105-107页 |
| ·References | 第107-109页 |
| Chapter 5 Efficient production of E2-INF gamma protein in silkworm by improvedBac-to-Bac/BmNPV baculovirus expression system | 第109-127页 |
| ·Abstract | 第109页 |
| ·Introduction | 第109-110页 |
| ·Experimental Materials | 第110-111页 |
| ·E2 Gene of CSFV and INFγ of sus scrofa (Pig) | 第110-111页 |
| ·Cloning vector | 第111页 |
| ·Using DH5α as a Transient Host | 第111页 |
| ·Expression host Strain | 第111页 |
| ·Restriction endonuclease | 第111页 |
| ·Reagents | 第111页 |
| ·Antibiotic, Chromogenic agents | 第111页 |
| ·Silkworm cells | 第111页 |
| ·Silkworm | 第111页 |
| ·Medium | 第111页 |
| ·SDS PAGE reagents and their preparation | 第111页 |
| ·Western blotting reagents | 第111页 |
| ·Experimental methods | 第111-119页 |
| ·Outline of experiment | 第111-114页 |
| ·Construction of recombinant donor plasmid pFastBacHTb/E2-INFγ | 第112-114页 |
| ·Cloning and expression strategy | 第114页 |
| ·Primer designed | 第114-115页 |
| ·RNA extraction | 第115页 |
| ·RT-PCR | 第115页 |
| ·PCR amplification | 第115-117页 |
| ·Ligation and digestion | 第117页 |
| ·Target fragment and cloning vector connection | 第117页 |
| ·Competent cells preparation for Transformation | 第117页 |
| ·Transformed in competent cells of the E.coli of DH5α | 第117页 |
| ·LB plate | 第117-118页 |
| ·Construction of recombinant donor plasmid pFastBacHTb/E2-INFγ | 第118页 |
| ·Recombinant plasmid-positive clone identification | 第118页 |
| ·Recombinant plasmid transformed into DH10BAC~(TM)E. coli | 第118页 |
| ·Recombinant Plasmid extraction | 第118页 |
| ·Construction of recombinant rBacmid/BmNPV/E2-INFγ virus | 第118页 |
| ·Silkworm | 第118页 |
| ·Construction of recombinant virus in BmN cell line | 第118-119页 |
| ·Expression of E2-INFγgene in silkworm cells | 第119页 |
| ·Expression of E2-INFγgene in silkworm larvae | 第119页 |
| ·SDS-PAGE | 第119页 |
| ·Western blotting | 第119页 |
| ·Results | 第119-124页 |
| ·The CSFV E2-INFγ gene bioinformatics analysis | 第119页 |
| ·Synthesis and analysis of E2-INFγ gene | 第119-121页 |
| ·Construction of recombinant pFastBac HTb/E2-INFγ vector | 第121-123页 |
| ·Construction of recombinant rBacmid/BmNPV/E2-INFγ virus | 第123页 |
| ·Expression of E2-INFγ gene in silkworm larvae | 第123-124页 |
| ·Discussion | 第124-125页 |
| ·References | 第125-127页 |
| Chapter 6 Conclusions and Future direction | 第127-131页 |
| ·Conclusion | 第127-129页 |
| ·Future direction | 第129-131页 |
| List of publications | 第131-133页 |
