| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-17页 |
| 1 绪论 | 第17-35页 |
| ·双生病毒的危害及重要性 | 第17-18页 |
| ·双生病毒的特征 | 第18-22页 |
| ·双生病毒的分类及基因组结构 | 第18-21页 |
| ·双生病毒卫星betasatellite分子的发现及其作用 | 第21-22页 |
| ·双生病毒的复制 | 第22-27页 |
| ·互补链的复制 | 第23页 |
| ·病毒链的复制 | 第23-25页 |
| ·双生病毒编码的Rep蛋白 | 第25页 |
| ·与双生病毒复制有关的寄主因子以及病毒编码的其它蛋白 | 第25-27页 |
| ·双生病毒的传播 | 第27-28页 |
| ·植物病毒的介体传播 | 第27页 |
| ·Begomovirus的传播 | 第27-28页 |
| ·病毒-介体昆虫-寄主植物的互作 | 第28-34页 |
| ·双生病毒-寄主植物的互作 | 第28-31页 |
| ·双生病毒-烟粉虱的互作 | 第31-32页 |
| ·烟粉虱-寄主植物的互作 | 第32-34页 |
| ·双生病毒-烟粉虱-寄主植物的三者互作 | 第34页 |
| ·结语 | 第34-35页 |
| 2 常规实验方法 | 第35-47页 |
| ·植物基因组DNA提取 | 第35-36页 |
| ·CTAB法提取植物基因组DNA | 第35页 |
| ·试剂盒法提取植物基因组DNA | 第35-36页 |
| ·植物cDNA的制备 | 第36-37页 |
| ·植物RNA的小量提取 | 第36页 |
| ·RNA样品中基因组DNA的去除 | 第36-37页 |
| ·反转录 | 第37页 |
| ·常规DNA克隆技术 | 第37-41页 |
| ·PCR技术 | 第37-39页 |
| ·PCR产物纯化 | 第39-40页 |
| ·连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第40页 |
| ·碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第40-41页 |
| ·重组质粒导入根癌农杆菌及植物接种 | 第41-42页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第41页 |
| ·重组质粒电击转化根癌农杆菌 | 第41-42页 |
| ·农杆菌介导的植物接种 | 第42页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第42-43页 |
| ·烟草叶盘的预培养和农杆菌侵染 | 第42页 |
| ·共培养与抗性筛选 | 第42页 |
| ·生根培养和土壤种植 | 第42-43页 |
| ·分子杂交 | 第43-47页 |
| ·Southern杂交 | 第43-44页 |
| ·Northern杂交 | 第44-45页 |
| ·Western杂交 | 第45-47页 |
| 3 中国番茄黄曲叶病毒与烟草曲茎病毒卫星复制专化性的分子机制 | 第47-90页 |
| ·材料与方法 | 第47-64页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·病毒材料 | 第47-48页 |
| ·突变体卫星DNA侵染性克隆的构建 | 第48-50页 |
| ·农杆菌介导的植物接种 | 第50-51页 |
| ·对各接种植株中病毒的PCR与Southern杂交检测 | 第51-52页 |
| ·Rep蛋白的原核表达 | 第52-53页 |
| ·Rep蛋白的的纯化、脱盐和浓缩 | 第53页 |
| ·DnaseI足迹试验 | 第53-55页 |
| ·凝胶阻滞试验(EMSA) | 第55-56页 |
| ·瞬时复制试验 | 第56-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-86页 |
| ·卫星DNAβ上的LCR区段影响复制专化性 | 第64-66页 |
| ·卫星DNAβ上的LCR区段决定了其复制专化性 | 第66-69页 |
| ·辅助病毒的Rep蛋白介导了卫星DNAβ的复制专化性 | 第69-70页 |
| ·Rep蛋白的原核表达与纯化 | 第70-71页 |
| ·Rep蛋白特异性的结合到LCR上的一个结构域 | 第71-73页 |
| ·Rep蛋白结合同源与异源DNAβ上结构域RBM的能力存在差异 | 第73-81页 |
| ·结构域RBM是DNAβ复制专化性的决定因子 | 第81-82页 |
| ·结构域RBM是DNAβ复制与侵染所必须的 | 第82-83页 |
| ·DNAβ在烟草原生质体中的瞬时复制 | 第83-85页 |
| ·结构域RBM决定DNAβ的复制专化性是在双生病毒中普遍存在的 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-90页 |
| 4 中国番茄黄曲叶病毒与介体烟粉虱的间接互惠机制 | 第90-126页 |
| ·材料与方法 | 第90-102页 |
| ·植物材料 | 第90-91页 |
| ·病毒材料 | 第91页 |
| ·供试昆虫 | 第91页 |
| ·烟草表达谱的高通量测序 | 第91-92页 |
| ·生物信息学分析 | 第92-93页 |
| ·烟草基因表达的qRT-PCR分析 | 第93-94页 |
| ·烟粉虱在种群增长试验 | 第94页 |
| ·普通烟VIGS | 第94-95页 |
| ·转基因载体的构建 | 第95-97页 |
| ·转基因普通烟的分子鉴定 | 第97页 |
| ·普通烟中SA和JA含量的测定 | 第97-98页 |
| ·MeJA处理普通烟对烟粉虱存活的影响 | 第98页 |
| ·数据统计分析 | 第98-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-122页 |
| ·卫星DNAβ是引起互惠共生所必须的 | 第102-103页 |
| ·病毒侵染后烟草表达谱的变化 | 第103-104页 |
| ·TYLCCNV和TYLCCNB共同侵染抑制JA防御途径基因的表达 | 第104-106页 |
| ·病毒侵染后引起的烟草SA和JA含量变化 | 第106-107页 |
| ·VIGS沉默SA和JA途径相关基因引起的烟粉虱种群增长速率的变化 | 第107-109页 |
| ·转基因沉默和过表达COI1基因引起的烟粉虱种群增长速率的变化 | 第109-111页 |
| ·外源MeJA处理对烟粉虱存活的影响 | 第111-112页 |
| ·突变体TYLCCNB对烟草防御的影响 | 第112-113页 |
| ·转基因βC1烟草的鉴定 | 第113-114页 |
| ·转基因βC1对烟草SA和JA防御途径的影响 | 第114-115页 |
| ·βC1对烟粉虱存活的影响 | 第115-117页 |
| ·TYLCCNV和TYLCCNB共同侵染抑制烟草萜类化合物合成基因的表达 | 第117-118页 |
| ·NtEAS在βC1转基因烟草或烟粉虱取食烟草中的表达 | 第118-119页 |
| ·VIGS沉默萜类合成相关基因对烟粉虱存活的影响 | 第119-121页 |
| ·转基因沉默萜类合成相关基因对烟粉虱存活的影响 | 第121-122页 |
| ·讨论 | 第122-126页 |
| 5 全文小结 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-143页 |
| 附录A 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第143-146页 |
| 附录B 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第146-147页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第147-154页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间巳发表论文 | 第154页 |
