| 致谢 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 前言 | 第20-24页 |
| 第一章 文献综述 | 第24-35页 |
| ·寄生蜂毒液蛋白组分的研究进展 | 第24-30页 |
| ·毒液生化性质 | 第24-26页 |
| ·寄生蜂毒液组分类型 | 第26-30页 |
| ·寄生蜂毒液蛋白生理功能的研究进展 | 第30-35页 |
| ·抑制寄主免疫 | 第30-32页 |
| ·调控寄主的生长发育 | 第32-33页 |
| ·麻痹及阻断寄主神经的作用 | 第33-35页 |
| 第二章 结合转录组和蛋白质组方法解析蝶蛹金小蜂毒液蛋白组分 | 第35-57页 |
| ·材料与方法 | 第36-42页 |
| ·供试昆虫 | 第36页 |
| ·毒腺的解剖 | 第36-37页 |
| ·RNA提取 | 第37页 |
| ·RNA-Seq测序文库制备 | 第37-38页 |
| ·RNA-Seq文库测序 | 第38页 |
| ·转录组的De novo组装 | 第38-39页 |
| ·转录组基因注释 | 第39-40页 |
| ·转录组数据差异分析 | 第40-41页 |
| ·毒液蛋白的制备 | 第41页 |
| ·毒液蛋白shotgun分析 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-55页 |
| ·毒腺转录组分析 | 第42-46页 |
| ·毒液蛋白质组分析 | 第46-47页 |
| ·基于转录组及蛋白质组信息的毒液组分综合分析 | 第47-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 蝶蛹金小蜂毒液钙网蛋白的功能及其与寄主菜粉蝶钙网蛋白关系的分析 | 第57-83页 |
| ·材料与方法 | 第58-67页 |
| ·供试昆虫 | 第58页 |
| ·总RNA提取 | 第58页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第58-59页 |
| ·原核表达及纯化 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第60-61页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第61页 |
| ·Western blotting | 第61页 |
| ·定量PCR | 第61-62页 |
| ·组织表达分布 | 第62页 |
| ·时间表达分布 | 第62页 |
| ·融合蛋白PpCRT与寄生蜂卵结合 | 第62-63页 |
| ·细胞免疫组织化学 | 第63页 |
| ·体外延展 | 第63-64页 |
| ·体外包囊 | 第64页 |
| ·注射及基因表达检测 | 第64-65页 |
| ·免疫刺激对菜粉蝶钙网蛋白表达的影响 | 第65页 |
| ·菜粉蝶血细胞体外包囊反应 | 第65页 |
| ·RNA干扰 | 第65-67页 |
| ·蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶钙网蛋白表达的影响 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-81页 |
| ·PpCRT的Coiled-coil结构域分析 | 第67页 |
| ·野生型及缺失Coiled-coil结构域的PpCRT原核表达及纯化 | 第67-68页 |
| ·组织分布 | 第68页 |
| ·毒腺及毒液中表达时相 | 第68-69页 |
| ·PpCRT结合到卵表面 | 第69-70页 |
| ·PpCRT进入菜粉蝶血细胞 | 第70-71页 |
| ·PpCRT抑制寄主血细胞延展 | 第71-74页 |
| ·PpCRT抑制寄主血细胞包囊 | 第74-75页 |
| ·PpCRT对PrCRT等基因的影响 | 第75-77页 |
| ·免疫刺激后PrCRT表达情况 | 第77页 |
| ·PrCRT体外促进包囊反应 | 第77-78页 |
| ·PrCRT RNA干扰后包囊能力降低 | 第78-80页 |
| ·蝶蛹金小蜂寄生抑制菜粉蝶血细胞钙网蛋白的表达 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 蝶蛹金小蜂毒液PACIFASTIN丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化及功能研究 | 第83-105页 |
| ·材料与方法 | 第84-92页 |
| ·供试昆虫 | 第84页 |
| ·毒液蛋白的制备 | 第84页 |
| ·RP-HPLC分离多肽 | 第84-85页 |
| ·质谱鉴定 | 第85页 |
| ·N端测序 | 第85页 |
| ·总RNA提取 | 第85页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第85页 |
| ·基因克隆 | 第85-86页 |
| ·原核表达载体构建及表达 | 第86-87页 |
| ·多肽化学合成 | 第87-89页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第89页 |
| ·组织表达分布 | 第89页 |
| ·时期表达分布 | 第89-90页 |
| ·对昆虫血淋巴PO活性及PPO激活的影响 | 第90-92页 |
| ·对丝氨酸蛋白酶活性的影响 | 第92页 |
| ·数据分析 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-103页 |
| ·毒液蛋白的RP-HPLC分离 | 第92页 |
| ·分子量测定 | 第92-93页 |
| ·N端测序 | 第93-94页 |
| ·PpPI基因克隆 | 第94-95页 |
| ·PpPI原核表达与纯化 | 第95页 |
| ·PpPI组织表达分布 | 第95-96页 |
| ·PpPI毒腺及毒液表达时相 | 第96-97页 |
| ·PpPI化学合成 | 第97-98页 |
| ·PpPI对昆虫PO活性及PPO激活的影响 | 第98-102页 |
| ·PpPI对丝氨酸蛋白酶活性的影响 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-105页 |
| 第五章 蝶蛹金小蜂毒液KAZAL类丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能研究 | 第105-115页 |
| ·材料与方法 | 第105-108页 |
| ·供试昆虫 | 第105-106页 |
| ·总RNA提取 | 第106页 |
| ·PCR和RACE | 第106页 |
| ·原核表达与纯化 | 第106页 |
| ·多肽化学合成 | 第106-107页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第107页 |
| ·组织表达分布 | 第107页 |
| ·时期表达分布 | 第107页 |
| ·对寄主血淋巴PO活性及PPO激活的影响 | 第107-108页 |
| ·数据分析 | 第108页 |
| ·结果与分析 | 第108-113页 |
| ·基因克隆及序列分析 | 第108页 |
| ·PpKazal基因的表达与纯化 | 第108-109页 |
| ·组织表达分布 | 第109-110页 |
| ·毒腺及毒液表达时相 | 第110-111页 |
| ·PpKazal对寄主血淋巴PO活性及PPO激活的影响 | 第111-113页 |
| ·讨论 | 第113-115页 |
| 第六章 蝶蛹金小蜂毒液普通气味结合蛋白特性分析 | 第115-127页 |
| ·材料与方法 | 第115-118页 |
| ·供试昆虫 | 第115-116页 |
| ·RNA提取 | 第116页 |
| ·基因克隆 | 第116页 |
| ·原核表达 | 第116页 |
| ·抗体制备 | 第116-117页 |
| ·组织表达分布 | 第117页 |
| ·时间表达分布 | 第117页 |
| ·交配对GOBP表达的影响 | 第117页 |
| ·营养条件对GOBP表达的影响 | 第117-118页 |
| ·寄生对GOBP表达的影响 | 第118页 |
| ·GOBP在毒腺中定位 | 第118页 |
| ·结果与分析 | 第118-125页 |
| ·GOBP基因的克隆 | 第118-119页 |
| ·GOBP原核表达 | 第119页 |
| ·GOBP组织分布 | 第119页 |
| ·毒腺及毒液表达时相 | 第119-121页 |
| ·交配对毒腺中GOBP表达的影响 | 第121页 |
| ·饲喂对毒腺中GOBP表达的影响 | 第121-122页 |
| ·寄生对毒腺中GOBP表达的影响 | 第122-124页 |
| ·GOBP定位于毒腺中 | 第124-125页 |
| ·讨论 | 第125-127页 |
| 第七章 总讨论 | 第127-130页 |
| ·寄生蜂毒液蛋白组分与功能 | 第127-129页 |
| ·本研究创新之处 | 第129页 |
| ·研究中存在的问题 | 第129页 |
| ·今后的研究方向 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-145页 |
| 附录：攻读博士学位期间发表学术论文 | 第145页 |
