| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的研究 | 第9-10页 |
| ·病原真菌中丝氨酸蛋白酶的研究进展 | 第10-12页 |
| ·食线虫真菌枯草杆菌蛋白酶的作用 | 第10-11页 |
| ·烟曲霉菌致病过程中的丝氨酸蛋白酶的作用 | 第11页 |
| ·KEXIN丝氨酸蛋白酶亚家族 | 第11-12页 |
| ·植物病原菌串珠镰刀菌 | 第12-13页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-30页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·供试菌株 | 第15页 |
| ·供试载体 | 第15页 |
| ·供试植物 | 第15页 |
| ·供试培养基 | 第15-16页 |
| ·生化试剂及有关溶液 | 第16页 |
| ·各类抗生素 | 第16页 |
| ·仪器 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-30页 |
| ·蛋白序列获得与分析 | 第16-17页 |
| ·串珠镰刀菌基因组DNA的粗提取 | 第17-18页 |
| ·串珠镰刀菌基因组DNA的快速粗提取 | 第18页 |
| ·DNA琼脂糖电泳 | 第18-19页 |
| ·PCR引物 | 第19-20页 |
| ·PCR扩增 | 第20页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·质粒酶切与连接 | 第23页 |
| ·串珠镰刀菌菌丝阶段总RNA的提取 | 第23-25页 |
| ·cDNA一链的合成方案 | 第25页 |
| ·载体的构建 | 第25-28页 |
| ·MoKEX2等基因敲除载体的构建 | 第25-27页 |
| ·FvKEx2基因互补载体的构建 | 第27-28页 |
| ·串珠镰刀菌原生质体制备和转化 | 第28-29页 |
| ·串珠镰刀菌突变体的表型观察 | 第29-30页 |
| ·菌落生长速度测定 | 第29页 |
| ·串珠串珠镰刀菌产孢量统计及细胞形态观察 | 第29页 |
| ·感病植物菌丝块接种 | 第29-30页 |
| ·数据统计整理 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·串珠镰刀菌丝氨酸蛋白家族生物信息学相关分析 | 第30-31页 |
| ·串珠镰刀菌FVKEX2(FVEG_03645)功能分析 | 第31-37页 |
| ·FvKEx2敲除载体构建 | 第31-32页 |
| ·敲除突变体验证 | 第32-33页 |
| ·串珠镰刀菌FvKEx2缺失突变体的反转录验证 | 第33页 |
| ·串珠镰刀菌FvKEx2互补转化子的获得和验证 | 第33-34页 |
| ·PCR筛选串珠镰刀菌FvKEx2互补突变体 | 第34页 |
| ·敲除突变体的表型分析 | 第34-37页 |
| ·敲除突变体生长速率明显下降而且菌丝形态也有明显变化 | 第34-35页 |
| ·珠镰刀菌FvKEx2互补突变体 | 第35-36页 |
| ·FvKEx2缺失导致突变体不能产孢 | 第36-37页 |
| 4 小结与讨论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 致谢 | 第43页 |