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一株B亚型ALV的分离、前病毒全基因组序列分析和感染性克隆的构建

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-36页
   ·禽白血病病毒不同亚群的划分第13-14页
   ·禽白血病病毒粒子的结构第14页
   ·禽白血病病毒的理化特性第14页
   ·禽白血病病毒的细胞培养第14-15页
   ·禽白血病病毒的宿主及传播方式第15-16页
   ·内源性禽白血病病毒第16-17页
   ·禽白血病病毒的基因组结构和功能第17-18页
   ·ALV 的感染周期与分子感染机理第18-22页
   ·禽白血病病毒的致肿瘤机制第22-26页
   ·克隆化病毒在研究病毒演化中的应用第26-27页
   ·病毒的反向遗传学第27-29页
     ·反向遗传学的概念第27页
     ·反向遗传学的原理第27-28页
     ·反向遗传学研究的方法第28-29页
     ·反转录病毒的反向遗传学第29页
   ·禽白血病的检测第29-31页
     ·病毒的分离与鉴定第30页
     ·双抗夹心 ELISA第30页
     ·聚合酶链式反应(PCR)第30-31页
   ·禽白血病的预防和控制第31-34页
     ·政府主管部门要强化种第31-32页
     ·保持种鸡群对 ALV 的高度洁净状态需要做好如下几方面:第32-33页
     ·原种鸡群的净化第33-34页
   ·本研究的背景、目的及意义第34-36页
     ·我国鸡群中 ALV 的流行现状第34页
     ·我国 J 亚群禽白血病的流行病学调查和病毒分离鉴定第34-35页
     ·研究目的和意义第35-36页
2 材料与方法第36-53页
   ·材料第36-37页
   ·一株 B 亚型 ALV 的分离第37-43页
     ·鸡胚来源第37页
     ·CEF 的制备与培养第37-38页
     ·DF-1 细胞上病毒培养第38页
     ·IFA 检测第38-39页
     ·细胞 DNA 的提取第39页
     ·env 基因的扩增和测序第39-43页
   ·SDAU09E3 株全基因组序列测定第43-45页
     ·引物设计第43-44页
     ·DNA 的制备第44页
     ·目的片段的扩增、克隆和测序第44页
     ·测序结果的拼接和全基因组序列的分析比较第44-45页
   ·两株 B 亚型 ALV 毒株全基因组序列和在 DF-1 细胞上复制性的比较第45页
     ·病毒的扩增和定量第45页
     ·两毒株在 DF-1 上复制性比较第45页
   ·感染性克隆的构建第45-48页
     ·引物设计第45-46页
     ·目的片段的扩增、克隆和测序第46页
     ·感染性克隆的构建策略第46-47页
     ·细胞的转染和克隆化病毒 rSDAU09E3 的拯救第47-48页
   ·参照 RSV 基因组结构,构建重组克隆 pSDAU09E3-fps第48-53页
     ·RSV 中 src 插入位点和 SDAU09E3 毒株 3′-Ter 的序列比较第48-49页
     ·Fu-J1 毒株的 v-fps 与 Fujinami 毒株 v-fps 的比较第49-50页
     ·引物设计第50-51页
     ·嵌合克隆 pSDAU09E3-fps 的构建第51-53页
     ·pSDAU09E3-fps 转染 CEF 和重组病毒的拯救第53页
3 结果与分析第53-65页
   ·一株 B 亚型 ALV SDAU09E3 的分离第53-55页
     ·种蛋中外源性 ALV 的检出率第53页
     ·IFA 检测第53-54页
     ·SDAU09E3 env 基因的 PCR 产物和阳性克隆双酶切结果第54页
     ·SDAU09E3 株与其他毒株 gp85 氨基酸序列同源性比较第54-55页
   ·SDAU09E3 前病毒全基因组测序第55-58页
     ·SDAU09E3 前病毒 cDNA 的分段扩增、测序及拼接第55-56页
     ·SDAU09E3 前病毒 cDNA 全基因组序列与已知 ALV 毒株相应序列的同源性比较第56-58页
   ·SDAU09E3 和 SDAU09C2 在 DF-1 细胞上复制能力的比较第58-59页
   ·SDAU09E3 感染性克隆的构建与病毒拯救第59-62页
     ·SDAU09E3 前病毒基因组的分段扩增第59-60页
     ·SDAU09E3 株 ALV-B 全基因组 cDNA 重组质粒 pUC19-SDAU09E3 的鉴定第60-61页
     ·重组质粒的感染性鉴定第61-62页
   ·SDAU09E3-fps 克隆的构建第62-65页
     ·src 基因的插入位点和 v-fps 的比较与修饰第62页
     ·嵌合克隆 pSDAU09E3-fps 的构建第62-63页
     ·pSDAU09E3-fps 转染 CEF 和重组病毒的拯救第63-65页
4 讨论第65-68页
5 结论第68-69页
参考文献第69-81页
致谢第81-82页
硕士期间发表论文情况第82页

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