| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| ·课题背景 | 第11-24页 |
| ·爱德华氏菌的分类地位和生物学特性 | 第11-14页 |
| ·爱德华氏菌的分类地位 | 第11-12页 |
| ·爱德华氏菌的生物学特性 | 第12-14页 |
| ·爱德华氏菌病的危害 | 第14-18页 |
| ·人类爱德华氏菌病 | 第14-15页 |
| ·鱼类爱德华氏菌病 | 第15-18页 |
| ·迟缓爱德华氏菌血清分型 | 第18-19页 |
| ·致病型爱德华氏菌微生物学检验 | 第19-20页 |
| ·细菌学检验方法 | 第19页 |
| ·免疫学检查方法 | 第19-20页 |
| ·迟缓爱德华氏菌的综合检验法 | 第20页 |
| ·爱德华氏菌的防治 | 第20-22页 |
| ·迟缓爱德华氏菌的毒力因子 | 第22-23页 |
| ·迟缓爱德华氏菌的鞭毛蛋白功能和研究现状 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第2章 菌株鉴定 | 第25-33页 |
| ·前言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·菌株培养 | 第25-26页 |
| ·回归实验 | 第26页 |
| ·攻毒鱼 | 第26页 |
| ·症状观察 | 第26页 |
| ·细菌分离 | 第26页 |
| ·生化鉴定 | 第26页 |
| ·巢氏PCR鉴定法的建立 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·PCR反应体系及反应条件 | 第26-27页 |
| ·血清型分析 | 第27-28页 |
| ·抗原的制备 | 第27页 |
| ·兔抗血清的制备 | 第27页 |
| ·兔抗血清效价的测定 | 第27-28页 |
| ·结果及分析 | 第28-32页 |
| ·回归实验 | 第28-30页 |
| ·攻击鱼症状 | 第28页 |
| ·分离细菌培养结果 | 第28-29页 |
| ·细菌鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·巢氏PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·血清型分析 | 第31-32页 |
| ·兔抗血清制备 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第3章 迟缓爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取和分析 | 第33-39页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·试验动物 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·迟缓爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取 | 第33-34页 |
| ·酸化超速离心法 | 第33-34页 |
| ·酸化高速离心法 | 第34页 |
| ·热激法 | 第34页 |
| ·抗血清的制备 | 第34页 |
| ·抗原的制备 | 第34页 |
| ·抗血清的制备 | 第34页 |
| ·免疫原性和抗原性的测定 | 第34-35页 |
| ·结果和分析 | 第35-36页 |
| ·不同方法比较的结果 | 第35页 |
| ·抗原ETF的制备 | 第35页 |
| ·ELISA结果 | 第35页 |
| ·Western-blotting结果分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| 第4章 迟缓爱德华氏菌的鞭毛基因的克隆和原核表达 | 第39-51页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·质粒和菌株 | 第39页 |
| ·质粒 | 第39页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·迟缓爱德华氏菌ET.Y.基因组的提取 | 第40页 |
| ·PCR扩增迟缓爱德华氏菌ET.Y.鞭毛基因 | 第40-41页 |
| ·PCR产物纯化 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5a、E.coliDE3 (BL21)感受态细胞制备 | 第42页 |
| ·ETF基因的克隆 | 第42页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第42-43页 |
| ·酶切鉴定 | 第43页 |
| ·ETF基因表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·ETFP基因表达产物ETFP-TrxA融合蛋白的定位 | 第44页 |
| ·ETFP基因表达条件优化 | 第44-45页 |
| ·IPTG浓度对ETFP-TrxA融合蛋白表达量的影响 | 第44-45页 |
| ·诱导时间对ETFP-TrxA融合蛋白表达量的影响 | 第45页 |
| ·结果和分析 | 第45-48页 |
| ·ETF基因的克隆、鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒构建 | 第46页 |
| ·ETF基因结构分析 | 第46页 |
| ·ETF基因表达产物ETFP-TrxA融合蛋白的定位 | 第46-48页 |
| ·ETFP基因表达条件优化 | 第48页 |
| ·诱导时间对ETFP-TrxA融合蛋白表达量的影响 | 第48页 |
| ·IPTG浓度对ETFP-TrxA融合蛋白表达量的影响 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第5章 基因表达融合蛋白的特性分析 | 第51-55页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·菌株 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·ETFP-TrxA融合蛋白的制备 | 第51页 |
| ·鞭毛蛋白抗原性分析 | 第51-52页 |
| ·ETFP-TrxA融合蛋白抗原性分析 | 第52页 |
| ·免疫试验 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-54页 |
| ·融合蛋白抗原性分析 | 第52-53页 |
| ·免疫印迹分析目的蛋白 | 第53-54页 |
| ·攻毒保护实验 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 第6章 论文小结 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读学位期间参与的科研项目和科研成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70-71页 |
