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系列逆转座子分子标记的建立及其在柿属植物中的应用研究

摘要第1-17页
Abstract第17-24页
缩略语表第24-25页
第一章 课题的提出和前人研究进展第25-57页
   ·课题的提出第25-27页
   ·前人研究进展第27-55页
     ·柿属植物种质资源研究进展第27-38页
       ·柿属植物的种类和分布第27页
       ·柿的品种资源及分布第27-29页
       ·柿的原产地及起源植物第29页
       ·柿的品种分类第29-30页
       ·柿属植物的品种鉴定、分类和亲缘关系分析研究第30-38页
         ·依据形态特征进行柿品种鉴定、分类和亲缘关系等研究第30-32页
         ·利用细胞学标记进行柿品种分类和柿属植物系统进化研究第32-33页
         ·利用同工酶进行柿品种鉴定、分类和亲缘关系等研究第33页
         ·利用DNA分子标记进行柿属植物品种鉴定、分类和亲缘关系等研究第33-37页
         ·利用基因的DNA序列进行柿属植物系统进化等研究第37-38页
     ·植物逆转座子的研究进展第38-44页
       ·逆转座子的类型和结构第38-39页
       ·LTR逆转座子的复制与转座机制第39-40页
       ·逆转座子的起源第40页
       ·逆转座子的分布特点第40-41页
       ·逆转座子的纵、横向传递第41页
       ·逆转座子的高异质性第41-42页
       ·逆转座子的活性第42-43页
       ·逆转座子在植物基因组进化中的作用第43-44页
         ·逆转座子与植物基因组扩增第43页
         ·逆转座子与植物基因组重排第43页
         ·逆转座子与基因突变第43-44页
         ·逆转座子的生物多样性与生物进化第44页
     ·逆转座子分子标记及其在果树上的应用第44-53页
       ·逆转座子分子标记的类型、原理及特点第44-47页
         ·SSAP逆转座子分子标记第45-46页
         ·IRAP逆转座子分子标记第46页
         ·REMAP逆转座子分子标记第46页
         ·RBIP逆转座子分子标记第46-47页
       ·逆转座子引物的获得第47-50页
         ·逆转座子基因序列引物的获得第47-48页
         ·逆转座子其它序列引物的获得第48-50页
       ·逆转座子分子标记在果树上的应用第50-53页
         ·品种鉴定及基因组组成分析第51-52页
         ·遗传多样性及系统进化分析第52页
         ·遗传作图与QTL定位第52-53页
       ·问题与展望第53页
     ·芽变及芽变研究中的分子标记应用进展第53-55页
       ·芽变的概念及其在果树育种中的地位第53-54页
       ·芽变的特点及遗传学基础第54页
       ·芽变研究中的分子标记应用进展第54-55页
   ·本研究的目的和内容第55-57页
     ·研究目的第55-56页
     ·研究内容第56页
     ·技术路线第56-57页
第二章 柿Tyl-copia类逆转座子RNase H-LTR序列分离、分析及逆转座子引物开发第57-76页
   ·前言第57-58页
   ·材料和方法第58-65页
     ·仪器及试剂耗材第58-59页
     ·试材第59页
     ·DNA提取第59-60页
     ·染色体步行法分离柿Tyl-copia类逆转座子RNaseH-LTR序列第60-65页
       ·基因组DNA的酶切第60页
       ·接头准备第60-61页
       ·接头连接第61页
       ·抑制PCR第一轮扩增第61-62页
       ·抑制PCR第二轮扩增第62页
       ·电泳检测第62页
       ·PCR产物纯化第62-63页
       ·PCR产物连接第63页
       ·感受态细胞的制备第63-64页
       ·转化第64页
       ·质粒DNA提取第64-65页
       ·阳性克隆检测第65页
       ·测序、序列分析和引物设计第65页
       ·序列提交第65页
   ·结果与分析第65-72页
     ·RNase H-LTR序列的PCR扩增及克隆测序第65-66页
     ·Tyl-copia类逆转座子RNaseH 3'端氨基酸序列特性分析第66-67页
     ·Tyl-copia类逆转座子PPT和末端倒转重复序列(IR)的特性分析第67-68页
     ·RNaseH-LTR序列的同源性及聚类分析第68-69页
     ·LTR序列中的启动子结构预测第69-71页
     ·逆转座子引物设计第71-72页
   ·讨论第72-76页
     ·利用RNaseH基因保守结构域分离柿Tyl-copia类逆转座子RNaseH-LTR序列的可行性第72页
     ·利用抑制PCR方法开发柿逆转座子引物的有效性第72-73页
     ·引物的有用性第73页
     ·柿逆转座子的高异质性第73-74页
     ·Tyl-copia类逆转座子LTR内的启动子结构与调控元件第74-76页
第三章 柿属植物IRAP和REMAP逆转座子分子标记技术体系的建立及其磨盘柿变异单株的IRAP分析第76-89页
   ·前言第76-77页
   ·材料和方法第77-79页
     ·材料第77页
     ·DNA提取第77页
     ·IRAP反应体系优化第77-78页
     ·IRAP分析第78页
     ·REMAP反应体系建立第78页
     ·产物电泳检测第78页
     ·数据分析第78-79页
   ·结果与分析第79-86页
     ·不同DNA模板浓度对IRAP反应的影响第79页
     ·不同Mg~(2+)浓度对IRAP反应的影响第79页
     ·不同dNTPs浓度对IRAP反应的影响第79-80页
     ·不同引物浓度对IRAP反应的影响第80页
     ·不同Taq聚合酶浓度对IRAP反应的影响第80页
     ·不同退火温度对IRAP反应的影响第80-81页
     ·IRAP反应体系的确立第81页
     ·IRAP分析结果第81-82页
     ·REMAP分子标记体系的确立第82-83页
     ·磨盘柿变异单株的IRAP分析第83-86页
       ·IRAP多态性分析第83页
       ·IRAP相似指数计算第83-85页
       ·IRAP聚类分析第85-86页
   ·讨论第86-89页
     ·IRAP反应体系的优化第86-87页
     ·IRAP扩增的多态性第87页
     ·IRAP对磨盘柿变异的鉴定第87-89页
第四章 柿属植物SSAP逆转座子分子标记技术体系的建立及其在遗传分析中的应用第89-111页
   ·前言第89页
   ·材料和方法第89-96页
     ·试材第89页
     ·DNA提取第89页
     ·SSAP分析第89-95页
       ·基因组DNA酶切第90-91页
       ·接头准备第91页
       ·连接反应第91-92页
       ·预扩增反应第92页
       ·选择性扩增反应第92-93页
       ·选择性扩增产物电泳检测第93-95页
         ·玻璃板的准备第93页
         ·制胶第93-94页
         ·预电泳第94页
         ·正式电泳第94页
         ·银染第94-95页
     ·数据统计第95-96页
   ·结果与分析第96-106页
     ·SSAP引物筛选及琼脂糖检测第96-97页
     ·逆转座子引物对SSAP扩增的影响第97-98页
     ·接头引物末端选择性碱基的组成及排序对SSAP扩增的影响第98-99页
     ·内切酶引物类别对SSAP扩增的影响第99-100页
     ·SSAP在柿属植物遗传分析中的应用第100-106页
       ·SSAP多态性分析第100页
       ·SSAP相似指数及聚类分析第100-102页
       ·高信息量SSAP引物组合的鉴定第102-103页
       ·基于不同逆转座子的SSAP分子标记应用于28份试材遗传分析的比较研究第103-106页
   ·讨论第106-111页
     ·SSAP体系建立需注意的问题第106页
     ·SSAP扩增的影响因素第106-108页
     ·SSAP分子标记的多态性第108页
     ·基于不同逆转座子因子的SSAP分子标记分析的特点第108-109页
     ·SSAP分子标记的聚类分析结果第109-111页
第五章 部分柿属植物亲缘关系的IRAP和ISTR分析第111-127页
   ·前言第111-112页
   ·材料和方法第112-115页
     ·材料第112-113页
     ·DNA提取第113页
     ·IRAP分析第113页
     ·ISTR分析第113-114页
       ·ISTR体系优化第113-114页
         ·ISTR扩增所选用引物序列第113-114页
         ·ISTR-PCR反应参数的设置第114页
       ·利用优化后的ISTR体系进行32份柿属基因型的正式分析第114页
     ·产物电泳检测第114页
     ·数据分析第114-115页
   ·结果与分析第115-122页
     ·柿属植物ISTR反应体系的建立第115-117页
       ·Mg~(2+)浓度第115页
       ·dNTP浓度第115页
       ·引物浓度第115页
       ·Taq酶浓度第115-116页
       ·DNA酶浓度第116-117页
       ·ISTR反应体系的确立第117页
     ·IRAP的多态性、相似指数、UPGMA聚类分析第117-119页
     ·ISTR的多态性、相似指数及UPGMA聚类分析第119-120页
     ·IRAP和ISTR在柿属植物亲缘关系分析中的比较研究第120-122页
       ·IRAP和ISTR多态性水平(Pi)、多样性指数(DI)、有效多重系数(EMR)及标记指数(MI)比较第120-121页
       ·IRAP和ISTR两种分子标记揭示的遗传相似性及相关性比较第121页
       ·IRAP和ISTR分子标记聚类结果比较第121-122页
   ·讨论第122-127页
     ·IRAP分子标记的多态性第122-123页
     ·柿属植物ISTR反应体系的优化第123页
     ·ISTR分子标记及多态性第123-124页
     ·IRAP和ISTR分子标记比较第124页
     ·基于IRAP和ISTR数据的柿属植物间的遗传关系第124-127页
第六章 柿属植物种间亲缘关系的IRAP和DAMD分析第127-145页
   ·前言第127-128页
   ·材料和方法第128-130页
     ·材料第128页
     ·DNA提取第128页
     ·IRAP分析第128页
     ·DAMD分析第128-130页
     ·产物电泳检测第130页
     ·数据分析第130页
   ·结果与分析第130-138页
     ·IPAP多态性、相似指数及UPGMA聚类分析第130-134页
     ·DAMD多态性、相似指数及UPGMA聚类分析第134-137页
     ·IRAP和ISTR在柿属植物亲缘关系分析中的比较研究第137-138页
       ·IRAP和ISTR多态性水平(Pi)、多样性指数(DI)、有效多重系数(EMR)及标记指数(MI)比较第137页
       ·IRAP和DAMD两种分子标记揭示的遗传相似性及相关性比较第137页
       ·IRAP和DAMD分子标记聚类结果比较第137-138页
   ·讨论第138-145页
     ·IRAP标记在柿属植物种间和种下的多态性第138-139页
     ·IRAP揭示的部分柿属植物的分类学地位第139-141页
     ·DAMD分子标记及其多态性第141-142页
     ·DAMD分子标记揭示的部分柿属植物的分类学地位第142-143页
     ·IRAP和DAMD分子标记比较第143-144页
     ·美洲柿的分类学地位第144-145页
第七章 IRAP、REMAP和SSAP逆转座子分子标记在柿属植物遗传分析中的应用第145-162页
   ·前言第145页
   ·材料和方法第145-149页
     ·试材第145-146页
     ·DNA提取第146页
     ·IRAP和REMAP分析第146-147页
     ·SSAP分析第147页
     ·AFLP分析第147页
     ·谱带统计及数据分析第147-149页
   ·结果与分析第149-157页
     ·IRAP、REMAP、SSAP用于柿属植物种质鉴定第149-151页
       ·IRAP、REMAP、SSAP多态性第149-150页
       ·IRAP、REMAP、SSAP用于柿属植物种质鉴定第150-151页
     ·AFLP多态性第151-152页
     ·SSAP和AFLP相似系数比较第152-153页
     ·IRAP、REMAP、SSAP、AFLP4种分子标记比较第153-157页
       ·4种分子标记多态性水平(Pi)、多样性指数(DI)、有效多重系数(EMR)及标记指数(MI)比较第153-154页
       ·4种分子标记揭示的遗传相似性及相关性比较第154-155页
       ·4种分子标记聚类结果比较第155-157页
   ·讨论第157-162页
     ·IRAP、REMAP和SSAP逆转座子进行种质鉴定第157-158页
     ·SSAP和AFLP遗传相似系数比较第158页
     ·IRAP、REMAP、SSAP、AFLP 4种分子标记比较第158-162页
第八章 逆转座子引物的通用性研究第162-181页
   ·前言第162页
   ·材料和方法第162-168页
     ·试材第162页
     ·样品总DNA提取第162-166页
       ·柿属植物、柑橘类、葡萄、枇杷、枣、板栗、石榴、银杏、猕猴桃DNA提取第162-164页
       ·桃、李、杏、樱桃DNA提取第164-165页
       ·苹果、梨、山楂DNA提取第165-166页
     ·样品总DNA质量检测及备用第166页
     ·逆转座子引物来源第166页
       ·柿逆转座子通用性检测引物来源第166页
       ·它物种逆转座子引物通用性检测引物来源第166页
     ·通用性检测第166页
     ·数据统计及分析第166-168页
   ·结果与分析第168-174页
     ·样品总DNA质量检测第168页
     ·柿逆转座子引物在果树类物种的通用性第168-171页
       ·罗田甜柿逆转座子引物在柿属植物种间、种下及其它果树物种上的通用性第168-169页
       ·罗田甜柿逆转座子引物在柿属、柑橘类、葡萄属、桃属和梨属植物中的IRAP多态性分析第169-170页
       ·罗田甜柿逆转座子引物在柿属、柑橘类、葡萄属、桃属和梨属植物中的亲缘关系分析第170-171页
     ·它物种逆转座子引物在果树类作物的通用性第171-174页
       ·它物种逆转座子引物在柿属植物的通用性研究第171-172页
       ·它物种逆转座子引物在果树类作物的通用性研究第172-174页
   ·讨论第174-181页
     ·样品总DNA提取方案的筛选第174-175页
     ·柿逆转座子引物在其它果树类中的通用性第175-176页
     ·它物种逆转座子引物在其它果树类中的通用性第176-181页
第九章 大别山区新发现的不完全甜柿类型的鉴定及其与‘罗田甜柿'的亲缘关系研究第181-191页
   ·前言第181页
   ·材料和方法第181-185页
     ·试材第181页
     ·树及果实形态学观察第181-183页
     ·单宁细胞大小及可溶性单宁含量测定第183页
     ·分子标记分析第183-185页
     ·分子标记数据统计及分析第185页
   ·结果与分析第185-189页
     ·树体形态观察第185页
     ·果实形态观察和可溶性单宁含量第185-186页
     ·单宁细胞形态观察及大小测定第186-188页
     ·分子标记分析第188-189页
   ·讨论第189-191页
     ·‘90-1-10'树型、果实形态及可溶性单宁含量分析第189-190页
     ·‘90-1-10'分子标记分析第190-191页
第十章 总结论及讨论第191-201页
   ·逆转座子引物开发、转用及逆转座子分子标记开发第191-192页
   ·不同分子标记方法及聚类分析结果的比较第192-196页
   ·不完全甜柿的发现及其在甜柿起源进化中的作用第196-197页
   ·‘金枣柿'的分类学地位第197-198页
   ·本研究的创新点第198-199页
   ·进一步工作设想第199-201页
参考文献第201-223页
致谢第223-224页
附录第224-232页
攻读博士学位期间发表论文第232页

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