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负载HCMV pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体的制备和鉴定

中文摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第8-10页
一、前言第10-17页
 1.抗原特异性细胞毒T淋巴细胞第10-11页
 2.MHCI类分子和HLA-A~*1101第11-13页
 3.四聚体技术第13-14页
 4.HCMV第14-15页
 5.本课题的研究目的和意义第15-16页
 6.本课题的技术路线第16-17页
二、实验材料与设备第17-23页
 1.血样来源第17页
 2.主要仪器和设备第17页
 3.主要试剂和材料第17-19页
 4.本实验中所用主要试剂配制方法第19-23页
三、实验方法与步骤第23-34页
 1.HLA-A2表型鉴定第23页
 2.HLA-A~*1101重链基因cDNA的克隆及鉴定第23-27页
 3.HLA-A11-BSP表达载体的构建第27-28页
 4.HLA-A11-BSP融合蛋白及β_2m在E.coli中的表达第28-29页
 5.SDS-PAGE第29页
 6.小鼠抗HLA-A~*0201抗血清制备第29-30页
 7.Western blot检测方法第30页
 8.IPTG诱导时间、温度和不同IPTG诱导浓度的筛选第30-31页
 9.HLA-A11-BSP在E.coli中的表达与包涵体纯化第31页
 10.HLA-A*1101-GPI单体的重折叠第31-32页
 11.HLA-A*1101-GPI单体生物素化及纯化第32页
 12.HLA-A*1101-GPI四聚体制备和鉴定第32页
 13.HLA-A11表型鉴定和血清HCMV特异性IgG测定第32页
 14.流式细胞仪分析第32-34页
四、实验结果第34-42页
 1.HLA-A*1101重链基因cDNA的克隆第34页
 2.HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体的构建及鉴定第34-35页
 3.HLA-A11-BSP融合蛋白在E.coli中的表达第35页
 4.HLA-A11-BSP融合蛋白的Western印迹分析第35-37页
 5.不同条件下HLA-A*1101-BSP的表达水平分析第37-39页
 6.HLA-A*1101-GPI单体及四聚体的制备第39-40页
 7.供者的筛选第40-42页
五、讨论第42-45页
六、结论第45-46页
REFERENCES(参考文献)第46-50页
附录第50-56页
 附录1 表达载体第50-52页
 附录2 英文缩略词第52-53页
 附录3 GenBank中我们克隆的HLA-A*1101的基因全序列第53-55页
 附录4 在校期间发表的主要研究论文情况第55-56页
致谢第56页

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