中文摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
目录 | 第8-10页 |
一、前言 | 第10-17页 |
1.抗原特异性细胞毒T淋巴细胞 | 第10-11页 |
2.MHCI类分子和HLA-A~*1101 | 第11-13页 |
3.四聚体技术 | 第13-14页 |
4.HCMV | 第14-15页 |
5.本课题的研究目的和意义 | 第15-16页 |
6.本课题的技术路线 | 第16-17页 |
二、实验材料与设备 | 第17-23页 |
1.血样来源 | 第17页 |
2.主要仪器和设备 | 第17页 |
3.主要试剂和材料 | 第17-19页 |
4.本实验中所用主要试剂配制方法 | 第19-23页 |
三、实验方法与步骤 | 第23-34页 |
1.HLA-A2表型鉴定 | 第23页 |
2.HLA-A~*1101重链基因cDNA的克隆及鉴定 | 第23-27页 |
3.HLA-A11-BSP表达载体的构建 | 第27-28页 |
4.HLA-A11-BSP融合蛋白及β_2m在E.coli中的表达 | 第28-29页 |
5.SDS-PAGE | 第29页 |
6.小鼠抗HLA-A~*0201抗血清制备 | 第29-30页 |
7.Western blot检测方法 | 第30页 |
8.IPTG诱导时间、温度和不同IPTG诱导浓度的筛选 | 第30-31页 |
9.HLA-A11-BSP在E.coli中的表达与包涵体纯化 | 第31页 |
10.HLA-A*1101-GPI单体的重折叠 | 第31-32页 |
11.HLA-A*1101-GPI单体生物素化及纯化 | 第32页 |
12.HLA-A*1101-GPI四聚体制备和鉴定 | 第32页 |
13.HLA-A11表型鉴定和血清HCMV特异性IgG测定 | 第32页 |
14.流式细胞仪分析 | 第32-34页 |
四、实验结果 | 第34-42页 |
1.HLA-A*1101重链基因cDNA的克隆 | 第34页 |
2.HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体的构建及鉴定 | 第34-35页 |
3.HLA-A11-BSP融合蛋白在E.coli中的表达 | 第35页 |
4.HLA-A11-BSP融合蛋白的Western印迹分析 | 第35-37页 |
5.不同条件下HLA-A*1101-BSP的表达水平分析 | 第37-39页 |
6.HLA-A*1101-GPI单体及四聚体的制备 | 第39-40页 |
7.供者的筛选 | 第40-42页 |
五、讨论 | 第42-45页 |
六、结论 | 第45-46页 |
REFERENCES(参考文献) | 第46-50页 |
附录 | 第50-56页 |
附录1 表达载体 | 第50-52页 |
附录2 英文缩略词 | 第52-53页 |
附录3 GenBank中我们克隆的HLA-A*1101的基因全序列 | 第53-55页 |
附录4 在校期间发表的主要研究论文情况 | 第55-56页 |
致谢 | 第56页 |