| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 符号与缩略语 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-44页 |
| 一、灵芝的研究概况 | 第18-28页 |
| 灵芝简介 | 第18页 |
| 1 灵芝的化学成分 | 第18-25页 |
| ·多糖 | 第18-20页 |
| ·三萜类化合物 | 第20-21页 |
| ·其它化学成分 | 第21-25页 |
| ·核苷类 | 第21-22页 |
| ·甾醇类 | 第22-23页 |
| ·生物碱类 | 第23-24页 |
| ·呋喃衍生物类 | 第24页 |
| ·氨基酸多肽类 | 第24-25页 |
| ·其它 | 第25页 |
| 2 灵芝的药理活性 | 第25-28页 |
| ·调节免疫作用 | 第26页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第26-27页 |
| ·其他药理作用 | 第27-28页 |
| ·降血糖作用 | 第27页 |
| ·保肝作用 | 第27页 |
| ·抗衰老作用 | 第27页 |
| ·抗炎镇痛作用 | 第27-28页 |
| ·保护心脏作用 | 第28页 |
| ·抗凝血作用 | 第28页 |
| 二、生物免疫疗法在抗肿瘤中的应用 | 第28-33页 |
| 1 肿瘤治疗概述 | 第28-29页 |
| 2 免疫疗法的原理 | 第29页 |
| 3 免疫疗法的分类 | 第29-31页 |
| ·特异性自动(主动)免疫疗法 | 第29-30页 |
| ·特异性被动免疫疗法 | 第30页 |
| ·过继免疫治疗 | 第30页 |
| ·非特异性免疫疗法 | 第30-31页 |
| 4 免疫疗法的应用 | 第31-33页 |
| ·全肿瘤细胞疫苗 | 第31页 |
| ·基因修饰疫苗 | 第31页 |
| ·DC疫苗 | 第31-32页 |
| ·自体T淋巴细胞疗法 | 第32页 |
| ·同种异体淋巴细胞疗法 | 第32-33页 |
| 5 免疫疗法的局限性及其发展趋势 | 第33页 |
| 三、细胞凋亡在抗肿瘤中的应用 | 第33-42页 |
| 1 细胞凋亡的生物学意义 | 第34页 |
| 2 细胞凋亡的形态学和生化特征 | 第34页 |
| 3 细胞凋亡的途径 | 第34-38页 |
| ·细胞凋亡的死亡受体途径 | 第35-36页 |
| ·细胞凋亡的线粒体途径 | 第36-38页 |
| 4 细胞凋亡的调控 | 第38-41页 |
| ·caspases蛋白酶的活化及其在凋亡通路中的主导作用 | 第38-39页 |
| ·caspases的结构与特征 | 第38页 |
| ·caspases的活化 | 第38-39页 |
| ·caspases对细胞结构的降解 | 第39页 |
| ·细胞凋亡的基因调控 | 第39-41页 |
| ·Bcl-2家族蛋白与凋亡调控 | 第41页 |
| 5 凋亡与肿瘤的关系 | 第41-42页 |
| 四、选题依据 | 第42-44页 |
| 第二章 灵芝多糖GLIS的免疫调节作用研究 | 第44-70页 |
| 一、前言 | 第44-45页 |
| 1 灵芝多糖免疫调节作用的研究现状 | 第44-45页 |
| 2 已有的工作基础 | 第45页 |
| 3 存在问题与研究目标 | 第45页 |
| 二、材料与方法 | 第45-55页 |
| 1 材料 | 第46-49页 |
| ·实验材料与药物 | 第46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·试剂配制 | 第46-48页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第46页 |
| ·细胞活性试验相关试剂 | 第46页 |
| ·Griess试剂 | 第46-47页 |
| ·Luminol发光液 | 第47页 |
| ·RT-PCR相关试剂 | 第47-48页 |
| ·ELISA相关试剂 | 第48页 |
| ·仪器设备 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-55页 |
| ·单糖组成分析 | 第49页 |
| ·蛋白含量测定 | 第49页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞(MSLs)的分离制备 | 第49页 |
| ·小鼠RAW264.7巨噬细胞株的培养 | 第49-50页 |
| ·L929细胞的培养 | 第50页 |
| ·小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的制备和培养 | 第50页 |
| ·细胞活性测定 | 第50页 |
| ·细胞呼吸爆发测定 | 第50-51页 |
| ·巨噬细胞NO产量测定 | 第51页 |
| ·RT-PCR法检测细胞因子基因表达 | 第51-55页 |
| ·总RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·RNA反转录 | 第52-53页 |
| ·PCR反应 | 第53-55页 |
| ·ELISA法检测细胞因子 | 第55页 |
| 三、结果与分析 | 第55-69页 |
| 1 灵芝多糖GLIS的理化性质分析 | 第55-57页 |
| ·灵芝提取物刺激细胞活性实验 | 第56页 |
| ·灵芝多糖GLIS的单糖组成和蛋白含量分析 | 第56-57页 |
| 2 GLIS对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的免疫调节作用 | 第57-62页 |
| ·RAW264.7细胞形态的变化 | 第57-58页 |
| ·灵芝多糖GLIS对RAW264.7释放NO量的影响 | 第58-59页 |
| ·灵芝多糖GLIS对RAW264.7的呼吸爆发的影响 | 第59-60页 |
| ·灵芝多糖GLIS对RAW264.7细胞表达相关细胞因子mRNA水平的影响 | 第60-62页 |
| ·不同浓度GLIS对细胞因子mRNA表达水平的影响 | 第60-61页 |
| ·不同处理时间对细胞因子mRNA表达水平的影响 | 第61-62页 |
| ·灵芝多糖GLIS对RAW264.7细胞分泌不同细胞因子的影响 | 第62页 |
| 3 GLIS对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的免疫调节作用的研究 | 第62-68页 |
| ·经GLIS处理后BMMs细胞形态的变化 | 第62-63页 |
| ·灵芝多糖GLIS对BMMs细胞活性的影响 | 第63-64页 |
| ·灵芝多糖GLIS对BMMs释放NO量的影响 | 第64-65页 |
| ·灵芝多糖GLIS对BMMs产生呼吸爆发的影响 | 第65-66页 |
| ·灵芝多糖GLIS对BMMs细胞表达相关细胞因子mRNA水平的影响 | 第66-67页 |
| ·灵芝多糖GLIS对BMMs细胞分泌不同细胞因子的影响 | 第67-68页 |
| 4 GLIS对小鼠脾淋巴细胞(MSLs)的免疫调节作用的研究 | 第68-69页 |
| ·灵芝多糖GLIS对MSLs呼吸爆发的影响 | 第68-69页 |
| 四、结论 | 第69-70页 |
| 第三章 灵芝三萜成分对肿瘤细胞的致凋亡作用 | 第70-94页 |
| 一、前言 | 第70-71页 |
| 1 灵芝三萜抗肿瘤作用研究概况 | 第70-71页 |
| 2 已有的工作基础 | 第71页 |
| 3 存在的问题和研究目标 | 第71页 |
| 二、材料与方法 | 第71-82页 |
| 1 材料 | 第71-75页 |
| ·药物 | 第72页 |
| ·试剂配制 | 第72-75页 |
| ·三萜测定相关试剂 | 第72页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第72页 |
| ·肿瘤抑制试验相关试剂 | 第72页 |
| ·荧光染色试剂 | 第72页 |
| ·annexin V-FITC/PI双染试剂 | 第72页 |
| ·RT-PCR相关试剂 | 第72页 |
| ·Caspase-3检测试剂 | 第72页 |
| ·Western-blot相关试剂 | 第72-75页 |
| ·细胞株 | 第75页 |
| ·仪器设备 | 第75页 |
| 2 方法 | 第75-82页 |
| ·GLAI中三萜含量的测定 | 第75-76页 |
| ·GLAI HPLC分析 | 第76页 |
| ·悬浮肿瘤细胞株的培养(L1210) | 第76页 |
| ·贴壁肿瘤细胞株的培养(SW620、K562和MCF7) | 第76页 |
| ·抑制肿瘤细胞增殖实验 | 第76页 |
| ·Hoechst3258荧光染色 | 第76-77页 |
| ·annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测 | 第77页 |
| ·RT-PCR法检测细胞因子基因表达变化 | 第77-79页 |
| ·总RNA的提取 | 第77页 |
| ·RNA反转录 | 第77页 |
| ·PCR反应 | 第77-79页 |
| ·GLAI处理对SW620细胞Caspase-3酶活性变化的检测 | 第79-80页 |
| ·Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达 | 第80-82页 |
| ·不同浓度药物处理细胞 | 第80页 |
| ·蛋白样品制备 | 第80页 |
| ·BCA法测蛋白含量 | 第80页 |
| ·SDS—PAGE电泳 | 第80-81页 |
| ·硝酸银染色 | 第81页 |
| ·转膜 | 第81页 |
| ·丽春红染色 | 第81页 |
| ·免疫反应 | 第81-82页 |
| ·显色 | 第82页 |
| 三、结果与分析 | 第82-93页 |
| 1 样品的制备 | 第82-85页 |
| ·样品的分离纯化 | 第82页 |
| ·灵芝三萜抑制肿瘤细胞增殖活性比较 | 第82-83页 |
| ·样品的理化性质分析 | 第83-85页 |
| ·GLAI三萜含量的测定 | 第83页 |
| ·GLAI HPLC分析 | 第83-85页 |
| 2 GLAI对SW620凋亡的影响 | 第85-93页 |
| ·GLAI抑制不同肿瘤细胞增殖 | 第85-86页 |
| ·SW620经GLAI处理后细胞形态的变化 | 第86-87页 |
| ·GLAI处理SW620细胞Hoechst3258荧光染色结果 | 第87-88页 |
| ·GLAI处理SW620细胞annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析 | 第88页 |
| ·GLAI处理对SW620细胞凋亡基因mRNA表达变化的影响 | 第88-90页 |
| ·GLAI处理SW620细胞Caspase-3酶活性变化的检测 | 第90-91页 |
| ·SW620细胞经GLAI处理后细胞凋亡相关蛋白的表达变化 | 第91-93页 |
| 四、结论 | 第93-94页 |
| 第四章 全文讨论 | 第94-100页 |
| 一、灵芝具有多相抗肿瘤的活性 | 第94-95页 |
| 二、GLIS多糖通过免疫激活抗肿瘤 | 第95页 |
| 三、GLIS可特异性激活巨噬细胞 | 第95-97页 |
| 四、GLAI可诱导肠癌细胞凋亡 | 第97-98页 |
| 五、GLAI诱导肠癌凋亡的相关信号传导途径中的蛋白发生变化 | 第98-99页 |
| 六、灵芝单一活性物质与多种活性物质作用的比较 | 第99-100页 |
| 第五章 全文总结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第114页 |
