| 缩写词及中文对照 | 第1-5页 |
| 摘 要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 1 引言 | 第15-35页 |
| ·研究目的和意义 | 第15-16页 |
| ·菊花基因工程研究进展 | 第16-27页 |
| ·中国菊花的发展历史 | 第16-17页 |
| ·国内外菊花育种的发展趋势 | 第17页 |
| ·菊花基因转化方法 | 第17-18页 |
| ·菊花基因转化受体系统的研究 | 第18-22页 |
| ·菊花再生体系的研究 | 第18-20页 |
| ·菊花对抗生素的敏感性研究 | 第20-21页 |
| ·菊花对不同菌株的敏感性研究 | 第21页 |
| ·外界因素对转化效果的影响 | 第21-22页 |
| ·菊花转基因研究进展 | 第22-27页 |
| ·改变菊花花色的基因工程 | 第22页 |
| ·改变菊花花型和株型的基因工程 | 第22页 |
| ·改变菊花花期的基因工程 | 第22-23页 |
| ·提高菊花抗病虫能力的基因工程 | 第23页 |
| ·提高菊花抗旱、耐盐和低温胁迫的基因工程 | 第23-27页 |
| ·植物甜菜碱合成相关酶的基因工程研究进展 | 第27-33页 |
| ·植物抗非生物胁迫(如低温、干旱、盐碱等)基因 | 第27页 |
| ·甜菜碱的生物合成 | 第27-28页 |
| ·植物甜菜碱合成相关酶的基因工程 | 第28-33页 |
| ·磷酸乙醇胺N-甲基转移酶基因(PEAMT) | 第29-31页 |
| ·胆碱单加氧酶基因(CMO) | 第31页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH) | 第31-33页 |
| ·基因工程中存在的的问题 | 第33页 |
| ·提高转化率 | 第33页 |
| ·提高对外源基因表达的调控能力 | 第33页 |
| ·本课题研究的主要内容和技术路线 | 第33-35页 |
| ·主要内容 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 2 菊花基因转化受体系统的建立 | 第35-48页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35-36页 |
| ·生化试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器和设备 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·菊花无菌苗体系的建立 | 第36-37页 |
| ·6-BA 和NAA 不同浓度配比对菊花品种叶片外植体再生的影响 | 第37页 |
| ·同一品种不同外植体不定芽再生能力的比较 | 第37页 |
| ·不同继代培养时间对菊花叶片形态发生能力的影响 | 第37页 |
| ·菊花无菌苗的继代增殖 | 第37页 |
| ·卡那霉素选择压力的确定 | 第37-38页 |
| ·卡那霉素对菊花无菌苗生根的影响 | 第38页 |
| ·抗生素 Cef 对农杆菌的抑菌试验 | 第38页 |
| ·数据统计与分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-46页 |
| ·不同灭菌时间对外植体启动培养的影响 | 第38-39页 |
| ·6-BA 和NAA 不同浓度配比对菊花品种叶片外植体再生的影响 | 第39-41页 |
| ·同一品种不同外植体不定芽再生能力的比较 | 第41页 |
| ·不同继代培养时间对菊花叶片外植体再生能力的影响 | 第41-42页 |
| ·不同培养基对菊花增殖培养的影响 | 第42-43页 |
| ·卡那霉素选择压力的确定 | 第43-44页 |
| ·卡那霉素对菊花无菌苗生根的影响 | 第44-46页 |
| ·抗生素 Cef 对农杆菌的抑菌试验 | 第46页 |
| ·结论与讨论 | 第46-48页 |
| ·菊花高效再生体系的建立 | 第46-47页 |
| ·抗生素种类和浓度的选择 | 第47-48页 |
| 3 菊花转 PEAMT 基因遗传转化体系的建立 | 第48-56页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·根癌农杆菌菌株及载体 | 第48页 |
| ·分子生物学试剂及缓冲液试剂的配制 | 第48页 |
| ·主要仪器和设备 | 第48-49页 |
| ·培养基及添加成分 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·根癌农杆菌的活化及工程菌液的制备 | 第49-50页 |
| ·预培养时间的确定 | 第50页 |
| ·农杆菌侵染浓度和时间的确定 | 第50页 |
| ·共培养时间的确定 | 第50页 |
| ·延迟培养时间的确定 | 第50页 |
| ·生根培养 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·预培养对菊花遗传转化的影响 | 第51页 |
| ·菌液浓度和侵染时间对菊花转化效果的影响 | 第51-52页 |
| ·共培养时间对菊花遗传转化的影响 | 第52-53页 |
| ·延迟培养时间对菊花遗传转化的影响 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-56页 |
| 4 菊花转 PEAMT 基因植株的获得 | 第56-67页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·试剂药品 | 第56页 |
| ·转基因菊花的 PCR 检测 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-64页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第57-58页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第57页 |
| ·质粒小提中量试剂盒提取质粒DNA | 第57-58页 |
| ·植物基因组 DNA 的提取 | 第58-60页 |
| ·CTAB 小量法提取菊花基因组 DNA | 第58-59页 |
| ·植物基因组DNA 试剂盒提取DNA | 第59-60页 |
| ·PCR 检测 | 第60页 |
| ·Southern-blotting 检测 | 第60-64页 |
| ·试剂配制 | 第60-61页 |
| ·探针的制备 | 第61页 |
| ·标记探针的检测 | 第61-62页 |
| ·植物基因组的酶切与琼脂糖凝胶电泳 | 第62页 |
| ·DNA 的转膜和固定 | 第62-63页 |
| ·杂交 | 第63页 |
| ·洗膜 | 第63页 |
| ·免疫检测 | 第63-64页 |
| ·转基因菊花叶片在筛选培养基上再生能力鉴定 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-66页 |
| ·转 PEAMT 基因植株的 PCR 检测 | 第64页 |
| ·PCR 阳性植株的Southern-blotting 分析 | 第64-65页 |
| ·转基因‘玉人面’叶片在筛选培养基上再生能力鉴定 | 第65-66页 |
| ·结论与讨论 | 第66-67页 |
| 5 地被菊转 PEAMT 基因植株的耐盐性分析 | 第67-78页 |
| ·实验材料 | 第67-69页 |
| ·植物材料及处理 | 第67-68页 |
| ·甜菜碱的提取、纯化和含量测定 | 第68页 |
| ·甜菜碱的提取 | 第68页 |
| ·甜菜碱的纯化 | 第68页 |
| ·液相色谱测定条件 | 第68页 |
| ·甜菜碱的鉴定及定量 | 第68页 |
| ·甜菜碱的标准曲线 | 第68页 |
| ·叶绿素荧光参数的定义与测定 | 第68-69页 |
| ·叶绿素荧光参数的定义 | 第68-69页 |
| ·叶绿素荧光参数的测定 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-70页 |
| ·转基因株系在盐胁迫处理后甜菜碱含量的动态变化 | 第69页 |
| ·转基因株系在盐胁迫处理后甜菜碱增量的差异 | 第69页 |
| ·不同盐浓度胁迫下转基因株系甜菜碱含量的比较 | 第69页 |
| ·150mmol/L 盐胁迫对转基因株系和对照叶绿素荧光参数的影响 | 第69-70页 |
| ·盐胁迫处理对转基因株系高生长的影响 | 第70页 |
| ·转基因株系与对照在盐胁迫处理后盐害指数及耐盐性比较 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-76页 |
| ·转基因株系和对照在盐胁迫处理后甜菜碱含量的动态变化 | 第70-71页 |
| ·转基因株系在盐胁迫处理后甜菜碱增量的差异 | 第71-72页 |
| ·不同盐浓度胁迫下转基因株系与对照甜菜碱含量的比较 | 第72页 |
| ·150mmol/L 盐胁迫对转基因株系和对照叶绿素荧光参数的影响 | 第72-74页 |
| ·盐胁迫处理对转基因株系高生长的影响 | 第74-75页 |
| ·转基因株系与对照在盐胁迫处理后盐害指数及耐盐性比较 | 第75-76页 |
| ·结论与讨论 | 第76-78页 |
| 6 主要结论和研究展望 | 第78-81页 |
| ·主要结论和创新点 | 第78-79页 |
| ·研究展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 附录 A 试剂 | 第92-95页 |
| 附录 B 常用缓冲液及培养基配方 | 第95-97页 |
| 个人简历 | 第97-98页 |
| 导师简介 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 博硕士论文同意发表的声明 | 第100页 |
