| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略语 | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| 1 立题的背景意义 | 第13-14页 |
| 2 国内外的研究现状 | 第14-31页 |
| ·植物光合途径的可转变性 | 第14页 |
| ·C_3、C_4植物对生态环境变化的可适应性 | 第14-15页 |
| ·C_4光合途径的酶促代谢反应 | 第15-16页 |
| ·C_4光合途径的限速反应 | 第16-17页 |
| ·C_4植物和CO_2泵 | 第17-18页 |
| ·C_4关键酶基因研究 | 第18-31页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因 | 第18-23页 |
| ·基因克隆及其序列比较分析研究 | 第18-20页 |
| ·PEPC蛋白序列及其结构研究 | 第20-21页 |
| ·PEPC功能及催化机制的研究 | 第21-22页 |
| ·PEPC的进化与磷酸化调节研究 | 第22-23页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因工程 | 第23-26页 |
| ·PEPC对C_3植物的转化及其表达 | 第23-24页 |
| ·PEPC在C_3植物中表达后的生理影响 | 第24-26页 |
| ·丙酮酸磷酸双激酶基因研究 | 第26-30页 |
| ·PPDK基因的克隆及表达调控研究 | 第26-28页 |
| ·磷酸双激酶PPDK酶基因工程 | 第28-30页 |
| ·用C_4光合酶基因改造C_3植物光合特性可能存在问题 | 第30-31页 |
| 3 本研究的目标和内容 | 第31-32页 |
| 第二章 稗属植物光合关键酶(PEPC、PPDK)基因的克隆 | 第32-49页 |
| 1 材料和方法 | 第32-34页 |
| ·植物材料和试剂 | 第32-33页 |
| ·总RNA的制备 | 第33页 |
| ·甲醛变性胶检测RNA | 第33页 |
| ·反转录 | 第33-34页 |
| ·稗草Ppc基因cDNA的克隆 | 第34页 |
| ·家稗Pdk基因cDNA的克隆 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-47页 |
| ·叶片总RNA及cDNA的电泳检测 | 第34-35页 |
| ·稗草Ppc和家稗Pdk cDNA全长的克隆 | 第35-39页 |
| ·稗草Ppc基因的序列测定 | 第35-37页 |
| ·家稗Pdk基因的序列测定 | 第37-39页 |
| ·序列比较分析及结构功能预测 | 第39-47页 |
| ·稗草Ppc基因及其编码蛋白比较分析 | 第39-43页 |
| ·稗草Ppc基因同源性检索及序列多重比对分析 | 第39-40页 |
| ·PEPC编码氨基酸序列同源性检索结果及多重对比分析 | 第40-41页 |
| ·新克隆稗草Ppc所属基因亚族类型分析 | 第41-42页 |
| ·PEPC编码蛋白质的功能位点与结构功能域确定 | 第42-43页 |
| ·PEPC蛋白氨基酸序列的系统进化分析 | 第43页 |
| ·家稗Pdk基因及其编码蛋白结构序列比较分析 | 第43-47页 |
| ·Pdk基因测序结果的同源性检索及ORF同源性比较 | 第43-45页 |
| ·pdkcDNA序列的系统进化分析 | 第45页 |
| ·PPDK编码氨基酸序列同源性检索结果及多重对比分析 | 第45-46页 |
| ·PPDK蛋白氨基酸序列的系统进化分析 | 第46页 |
| ·家稗PPDK编码蛋白的结构功能域预测 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 稗草PEPC基因对水稻和烟草的遗传转化 | 第49-73页 |
| 1 材料和方法 | 第49-57页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-57页 |
| ·玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的启动子的PCR克隆 | 第50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50页 |
| ·PCR扩增 | 第50页 |
| ·扩增产物回收及测序 | 第50页 |
| ·植物表达载体的改造 | 第50-53页 |
| ·pUbi-Eppc载体的构建 | 第50-52页 |
| ·pRbcS-Eppc载体的构建 | 第52-53页 |
| ·pZmp-Eppc载体的构建 | 第53页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第53-54页 |
| ·水稻的遗传转化与筛选 | 第54-55页 |
| ·烟草的转化与筛选 | 第55-56页 |
| ·转化 | 第55页 |
| ·筛选 | 第55-56页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第56-57页 |
| ·GUS组织化学检测 | 第56页 |
| ·PCR检测 | 第56页 |
| ·RT-PCR检测 | 第56页 |
| ·Western杂交 | 第56页 |
| ·转基因水稻叶片PEPC活性的测定 | 第56-57页 |
| ·转基因水稻光合生理测定 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-71页 |
| ·玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因启动子的克隆 | 第57-58页 |
| ·植物表达Ppc基因的载体的构建 | 第58-59页 |
| ·pUbi-Eppc表达载体的酶切鉴定 | 第58页 |
| ·pRbcS-Eppc表达载体的酶切鉴定 | 第58页 |
| ·pZmp-Eppc表达载体的酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·转基因植物的分化及培养 | 第59-63页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织诱导及分化苗的培养 | 第59-61页 |
| ·烟草叶盘愈伤组织的诱导及分化苗的培养 | 第61-63页 |
| ·转基因植物的检测 | 第63-71页 |
| ·GUS组织染色法检测 | 第63-64页 |
| ·转基因水稻的分子鉴定结果 | 第64-71页 |
| ·转基因水稻植株的PCR检测 | 第64-65页 |
| ·转基因水稻PEPC基因表达的RT-PCR检测 | 第65-66页 |
| ·转基因水稻PEPC蛋白的Western检测 | 第66页 |
| ·转基因水稻的PEPC活性 | 第66-68页 |
| ·转基因水稻的气体交换特征 | 第68-70页 |
| ·转基因水稻可溶性糖和可溶性蛋白含量 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 小结 | 第73-75页 |
| 1 基因克隆 | 第73页 |
| 2 载体构建 | 第73页 |
| 3 水稻和烟草的遗传转化和分子鉴定 | 第73页 |
| 4 转基因植物的生理特征 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-97页 |
| 附录一 培养基及常用储存液的配制 | 第90-93页 |
| 附录二 常用分子生物学实验方法 | 第93-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
