水稻突变体库的构建和旁邻序列分析
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 一 文献综述 | 第8-21页 |
| 1 水稻基因组学的研究进展 | 第8-9页 |
| 2 水稻突变体库的构建策略和进展 | 第9页 |
| 3 转座子的种类和转座子标签技术 | 第9-13页 |
| ·转座子的种类 | 第9-10页 |
| ·转座子在基因组学的应用 | 第10-11页 |
| ·转座子体系 | 第10-11页 |
| ·自主转座元件单因子体系 | 第10页 |
| ·反转录转座元件体系 | 第10-11页 |
| ·双元转座子体系 | 第11页 |
| ·转座子标签技术克隆基因的基本原理 | 第11页 |
| ·转座子标签在异源植物中的应用及研究进展 | 第11-12页 |
| ·转座子标签的改进 | 第12-13页 |
| ·转座子捕捉 | 第12-13页 |
| ·位点特异重组和激活标签 | 第13页 |
| 4 转座子在水稻基因组学中研究进展 | 第13-15页 |
| ·转座子标签法克隆水稻基因 | 第13-15页 |
| 5 农杆菌介导水稻的遗传转化 | 第15-16页 |
| ·研究的起始 | 第15页 |
| ·水稻转基因的主要方法 | 第15-16页 |
| ·农杆菌转化法是构建水稻突变体库的最优方案 | 第16页 |
| 6 旁邻序列克隆 | 第16-18页 |
| ·基于Southern的方法 | 第16-17页 |
| ·基于PCR的方法 | 第17-18页 |
| ·反向PCR | 第17页 |
| ·TAIL-PCR | 第17页 |
| ·AIMS法 | 第17-18页 |
| 7 DNA自动化测序技术进展 | 第18-20页 |
| 8 开题设想 | 第20-21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第20页 |
| ·研究的内容 | 第20-21页 |
| 二 材料与方法 | 第21-37页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·质粒和细菌 | 第21页 |
| ·酶和生化试剂 | 第21页 |
| ·培养基和溶液 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-37页 |
| ·工具酶的使用 | 第23-24页 |
| ·植物DNA的提取 | 第24页 |
| ·质粒的分离、纯化和转化 | 第24-25页 |
| ·质粒DAN的碱法小量提取 | 第24-25页 |
| ·测序用的质粒DAN模板的纯化 | 第25页 |
| ·热激法转化质粒DNA | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| ·DNA凝胶电泳和回收 | 第26页 |
| ·水稻的遗传与转化 | 第26-27页 |
| ·愈伤组织的获得 | 第26-27页 |
| ·遗传转化 | 第27页 |
| ·选择培养 | 第27页 |
| ·抗性苗的获得 | 第27页 |
| ·basta的抗性检测 | 第27页 |
| ·水稻转化后代种子的潮霉素(HYG)抗性检测方法 | 第27页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第27-28页 |
| ·Southern杂交 | 第28-30页 |
| ·旁邻序列的扩增 | 第30-34页 |
| ·TAIL-PCR | 第30-32页 |
| ·反向PCR | 第32-34页 |
| ·测序 | 第34-36页 |
| ·序列分析 | 第36页 |
| ·转座子DS锚定系的建立 | 第36-37页 |
| 三 结果与分析 | 第37-48页 |
| ·转DS因子的水稻转化植株的获得 | 第37页 |
| ·BASTA的检测结果 | 第37页 |
| ·转基因植株的分子检测结果 | 第37-38页 |
| ·PCR检测结果 | 第37-38页 |
| ·Southern杂交检测 | 第38页 |
| ·转基因植株T0代及后代的形态观察 | 第38-39页 |
| ·转化植株的纯合子的获得 | 第39页 |
| ·带DS因子的T-DNA的旁邻序列的克隆与分析 | 第39-44页 |
| ·带DS因子的T-DNA插入图谱 | 第44-46页 |
| ·转座子锚定系的建立 | 第46页 |
| ·突变体的旁邻序列分析 | 第46-48页 |
| 四 讨论 | 第48-51页 |
| 1 农杆菌转化的优化 | 第48页 |
| 2 用系统论的方法来完善突变体库 | 第48-49页 |
| 3 突变体的分析策略 | 第49页 |
| 4 转座子旁邻序列数据库的构建 | 第49-50页 |
| 5 大协作与合作 | 第50页 |
| 6 后续研究 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |
