| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| ·立题背景及意义 | 第8-10页 |
| ·立题背景 | 第8-9页 |
| ·立题意义 | 第9-10页 |
| ·国内外研究概况 | 第10-12页 |
| ·国外研究概况 | 第10-11页 |
| ·国内研究概况 | 第11-12页 |
| ·本论文研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 酸性脲酶的制备 | 第13-24页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·菌种 | 第13-14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·仪器 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-17页 |
| ·溶液的配制 | 第14-15页 |
| ·菌体制备 | 第15页 |
| ·酶活测定及酶活定义 | 第15页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第15页 |
| ·细胞破碎率D 的测定 | 第15页 |
| ·酶活回收率R 的测定 | 第15页 |
| ·高压匀浆法破碎细胞 | 第15-16页 |
| ·超声法破碎细胞 | 第16页 |
| ·溶菌酶与超声法结合破碎细胞 | 第16页 |
| ·双水相萃取酸性脲酶 | 第16-17页 |
| ·结果与分析 | 第17-23页 |
| ·匀浆压力对细胞破碎过程的影响 | 第17页 |
| ·匀浆次数对细胞破碎过程的影响 | 第17-18页 |
| ·菌体浓度对细胞破碎过程的影响 | 第18页 |
| ·不同破碎方法的比较 | 第18-19页 |
| ·聚乙二醇/磷酸氢二钾体系相图 | 第19页 |
| ·体系总浓度对酸性脲酶分配行为的影响 | 第19-21页 |
| ·体系pH 值对酸性脲酶分配行为的影响 | 第21-22页 |
| ·NaCl 浓度对酸性脲酶分配行为的影响 | 第22-23页 |
| ·本章小结 | 第23-24页 |
| 第三章 酸性脲酶的纯化 | 第24-31页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·粗酶冻干粉 | 第24页 |
| ·层析填料 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-26页 |
| ·酶活测定、酶活定义及蛋白浓度的测定 | 第25页 |
| ·方案一 | 第25-26页 |
| ·方案二 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-30页 |
| ·ACA34 凝胶过滤层析 | 第26-27页 |
| ·DEAE 离子交换层析 | 第27页 |
| ·方案一纯化结果分析 | 第27-28页 |
| ·Superdex 200 凝胶过滤层析 | 第28页 |
| ·MonoQ 离子交换层析 | 第28-29页 |
| ·方案二纯化结果分析 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第四章 酸性脲酶的酶学性质 | 第31-38页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·酶粉 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·酸性脲酶的PVDF 膜印迹 | 第32页 |
| ·N 端序列的测定 | 第32页 |
| ·全酶分子量的测定 | 第32页 |
| ·最适温度 | 第32页 |
| ·最适pH 值 | 第32页 |
| ·温度稳定性 | 第32页 |
| ·pH 稳定性 | 第32-33页 |
| ·金属离子及有机酸的影响 | 第33页 |
| ·米氏常数K_m及最大反应速度V_(max) 的测定 | 第33页 |
| ·黄酒中尿素去除率的测定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·N 端氨基酸残基序列的测定 | 第33页 |
| ·全酶及亚基分子量的测定 | 第33页 |
| ·最适温度 | 第33-34页 |
| ·温度稳定性 | 第34页 |
| ·最适pH 值 | 第34-35页 |
| ·pH 稳定性 | 第35页 |
| ·金属离子及有机酸的影响 | 第35-36页 |
| ·米氏常数K_m和最大反应速度V_(max) 的测定 | 第36页 |
| ·黄酒中尿素去除率的测定 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第五章 结论与展望 | 第38-39页 |
| ·主要结论 | 第38页 |
| ·展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 攻读硕士学位论文期间发表的论文 | 第43-44页 |
| 附录：酸性脲酶测序报告单 | 第44页 |