| 中文摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 主要英文缩写与译名 | 第18-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-47页 |
| 第一节 植酸的特性 | 第21-24页 |
| 1 植酸的理化特性 | 第21页 |
| 2 植酸的分布 | 第21-22页 |
| 3 植酸的抗营养作用 | 第22-24页 |
| ·植酸-金属离子复合物的抗营养效应 | 第22页 |
| ·植酸-蛋白质复合物的抗营养效应 | 第22-23页 |
| ·磷资源的浪费与环境污染 | 第23页 |
| ·植酸对消化酶的抑制作用 | 第23-24页 |
| ·其它危害 | 第24页 |
| 第二节 中性植酸酶的来源及其酶学性质 | 第24-28页 |
| 1 中性植酸酶的来源 | 第24-26页 |
| 2 中性植酸酶的酶学性质 | 第26-28页 |
| ·一般酶学性质 | 第26页 |
| ·中性植酸酶的热稳定性 | 第26-27页 |
| ·内源酶对中性植酸酶的影响 | 第27页 |
| ·中性植酸酶的底物特异性 | 第27-28页 |
| 第三节 中性植酸酶的结构及其催化机理 | 第28-35页 |
| 1 中性植酸酶的基因结构 | 第28-29页 |
| 2 中性植酸酶的晶体结构 | 第29-34页 |
| ·整体结构与空间构象 | 第29-30页 |
| ·芽孢杆菌中性植酸酶分子中的Ca~(2+)及其功能 | 第30-34页 |
| 3 中性植酸酶的催化机制 | 第34-35页 |
| 第四节 中性植酸酶基因的表达 | 第35-40页 |
| 1 中性植酸酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第36-37页 |
| 2 中性植酸酶基因在芽孢杆菌中的表达 | 第37页 |
| 3 中性植酸酶基因在酵母中的表达 | 第37-38页 |
| 4 中性植酸酶基因在植物中的表达 | 第38-40页 |
| 第五节 中性植酸酶的应用 | 第40-44页 |
| 1 中性植酸酶在饲料工业中的应用 | 第40-41页 |
| ·提高植酸磷的利用率,减轻水环境污染 | 第40-41页 |
| ·提高矿物元素的生物利用率 | 第41页 |
| ·提高鱼类对蛋白质及脂肪的利用率 | 第41页 |
| ·降低植酸盐的抗营养作用的同时提供营养物质 | 第41页 |
| 2 中性植酸酶在食品工业中的应用 | 第41-42页 |
| 3 中性植酸酶在医药工业中的应用 | 第42-43页 |
| 4 影响中性植酸酶应用的因素 | 第43-44页 |
| ·中性植酸酶的添加水平 | 第43页 |
| ·中性植酸酶的添加方式 | 第43页 |
| ·饲料中营养成分的影响 | 第43-44页 |
| 第六节 中性植酸酶对Ca~(2+)的依赖性 | 第44-47页 |
| 1 Ca~(2+)对中性植酸酶催化活性的影响 | 第44-45页 |
| ·Ca~(2+)参与降解复合物的形成 | 第44页 |
| ·Ca~(2+)对植酸降解的影响 | 第44页 |
| ·过量Ca~(2+)和植酸对植酸降解的影响 | 第44-45页 |
| 2 Ca~(2+)对中性植酸酶蛋白空间构象的影响 | 第45-47页 |
| 第二章 研究报告 | 第47-136页 |
| 第一节 中性植酸酶产生菌的筛选、鉴定及其酶学性质分析 | 第47-79页 |
| 试验一 产中性植酸酶微生物的筛选及鉴定 | 第48-63页 |
| 1 试验材料 | 第48-52页 |
| 2 试验方法 | 第52-57页 |
| ·中性植酸酶产生菌的筛选 | 第52页 |
| ·中性植酸酶的制备及测定方法 | 第52-53页 |
| ·菌体形态学观察 | 第53页 |
| ·理化性质分析 | 第53-54页 |
| ·16S rRNA序列分析 | 第54-57页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·菌株的筛选 | 第57-58页 |
| ·培养特征和形态学观察 | 第58页 |
| ·理化性质分析 | 第58-59页 |
| ·16S rRNA序列分析 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 试验二 地衣芽孢杆菌ZJ-6液态发酵产酶条件的研究 | 第63-70页 |
| 1 试验材料 | 第63页 |
| 2 试验方法 | 第63-64页 |
| ·菌株产酶条件的优化 | 第63-64页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-68页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第64-65页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第65-66页 |
| ·初始pH对产酶的影响 | 第66页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第66-67页 |
| ·菌株生长及产酶进程 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 试验三 地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶部分酶学特性分析 | 第70-78页 |
| 1 试验材料 | 第70页 |
| 2 试验方法 | 第70-71页 |
| ·地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶的制备及测定方法 | 第70页 |
| ·地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶部分酶学特性分析 | 第70-71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-75页 |
| ·温度对地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶活性的影响 | 第71-72页 |
| ·pH对地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶活性的影响 | 第72-73页 |
| ·金属离子和部分有机化学试剂对地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶活性的影响 | 第73-74页 |
| ·地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶底物特异性分析 | 第74页 |
| ·氟化钠和钒酸铵对地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶活性的影响 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| 小结 | 第78-79页 |
| 第二节 地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶基因克隆及序列分析 | 第79-95页 |
| 1 试验材料 | 第80页 |
| 2 试验方法 | 第80-81页 |
| ·地衣芽孢杆菌ZJ-6中性植酸酶基因的克隆 | 第80页 |
| ·割胶回收及DNA片段的连接 | 第80页 |
| ·感受态细胞E.coli TOP10F’的制备与转化 | 第80-81页 |
| ·重组质粒的提取及阳性克隆子的鉴定 | 第81页 |
| ·测序及分析 | 第81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-90页 |
| ·PCR结果 | 第81页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第81-82页 |
| ·序列分析 | 第82-88页 |
| ·结构预测 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 第三节 中性植酸酶基因phyC在大肠杆菌中的表达及重组酶特性分析 | 第95-114页 |
| 试验一 中性植酸酶基因phyC在大肠杆菌中的表达 | 第96-103页 |
| 1 试验材料 | 第96页 |
| 2 试验方法 | 第96-98页 |
| ·中性植酸酶基因的亚克隆 | 第96-97页 |
| ·重组质粒的酶切 | 第97页 |
| ·表达载体的酶切 | 第97页 |
| ·重组质粒与表达载体的连接 | 第97-98页 |
| ·感受态细胞Ecoli BL21的制备与转化 | 第98页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第98页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第98页 |
| 3 结果与分析 | 第98-101页 |
| ·中性植酸酶基因phyC的扩增 | 第98-99页 |
| ·阳性克隆子筛选与鉴定 | 第99页 |
| ·重组质粒pUCm-phyC的提取与双酶切 | 第99-100页 |
| ·pET-30a(+)表达载体的的提取与双酶切 | 第100页 |
| ·重组质粒pET-30a(+)-phyC的PCR和酶切鉴定 | 第100-101页 |
| ·中性植酸酶基因阳性表达子的酶活测定 | 第101页 |
| 4 讨论 | 第101-103页 |
| 试验二 重组中性植酸酶EPhyC5酶学特性研究 | 第103-113页 |
| 1 试验材料 | 第103页 |
| 2 试验方法 | 第103-106页 |
| ·基因工程菌的培养 | 第103页 |
| ·表达产物的纯化 | 第103-104页 |
| ·酶活测定及酶学特性分析 | 第104页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳试剂配制 | 第104-105页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第105-106页 |
| 3 结果与分析 | 第106-111页 |
| ·重组中性植酸酶EPhyC5的纯化及SDS-PAGE分析 | 第106-107页 |
| ·温度对重组中性植酸酶EPhyC5活性的影响 | 第107-108页 |
| ·pH对重组中性植酸酶EPhyC5活性的影响 | 第108-109页 |
| ·金属离子和部分有机化学试剂对重组中性植酸酶EPhyC5活性的影响 | 第109页 |
| ·大肠杆菌重组中性植酸酶EPhyC5底物特异性分析 | 第109-110页 |
| ·氟化钠和钒酸铵对重组中性植酸酶EPhyC5的影响 | 第110-111页 |
| 4 讨论 | 第111-113页 |
| 小结 | 第113-114页 |
| 第四节 中性植酸酶成熟肽phyCm在毕赤氏酵母中的分泌表达及酶学性质研究 | 第114-136页 |
| 试验一 中性植酸酶成熟肽基因phyCm在毕赤氏酵母中的表达 | 第115-126页 |
| 1 试验材料 | 第115-117页 |
| 2 试验方法 | 第117-121页 |
| ·中性植酸酶成熟肽的亚克隆 | 第117页 |
| ·pPIC9K的提取和双酶切 | 第117-118页 |
| ·pPIC9K-phyCm质粒的构建 | 第118页 |
| ·pPIC9K-phyCm质粒的大量提取 | 第118-119页 |
| ·pPIC9K-phyCm质粒线性化及浓缩 | 第119页 |
| ·毕赤氏酵母GS115感受态细胞的制备 | 第119-120页 |
| ·电击转化 | 第120页 |
| ·酵母转化子的筛选和培养 | 第120页 |
| ·酵母阳性转化子的PCR鉴定 | 第120-121页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第121页 |
| 3 结果与分析 | 第121-124页 |
| ·中性植酸酶成熟肽phyCm的亚克隆 | 第121-122页 |
| ·阳性克隆子筛选与鉴定 | 第122页 |
| ·pPIC9K-phyCm质粒的构建 | 第122-123页 |
| ·pPIC9K-phyCm质粒的提取和线性化 | 第123-124页 |
| ·电击转化和阳性转化子的筛选 | 第124页 |
| ·酵母阳性表达子的筛选 | 第124页 |
| 4 讨论 | 第124-126页 |
| 试验二重组中性植酸酶PPhyCm6酶学性质分析 | 第126-135页 |
| 1 试验材料 | 第126页 |
| 2 试验方法 | 第126-127页 |
| ·重组中性植酸酶的纯化 | 第126-127页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第127页 |
| ·活性测定及酶学性质分析 | 第127页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第127页 |
| 3 结果与分析 | 第127-132页 |
| ·重组中性植酸酶PPhyCm6的纯化及SDS-PAGE分析 | 第127-129页 |
| ·温度对重组中性植酸酶PPhyCm6活性的影响 | 第129-130页 |
| ·pH对重组中性植酸酶PPhyCm6活性的影响 | 第130页 |
| ·金属离子和部分有机化学试剂对重组中性植酸酶PPhyCm6活性的影响 | 第130-131页 |
| ·重组中性植酸酶PPhyCm6底物特异性 | 第131-132页 |
| ·氟化钠和钒酸铵对重组中性植酸酶PPhyCm6活性的影响 | 第132页 |
| 4 讨论 | 第132-135页 |
| 小结 | 第135-136页 |
| 第三章 主要结论、创新点及后续研究展望 | 第136-138页 |
| 1 主要结论 | 第136-137页 |
| 2 创新点 | 第137页 |
| 3 后续研究展望 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-158页 |
| 附录 | 第158-161页 |
| 个人简历和主要发表及录用的论文 | 第161页 |
