| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1. 引言 | 第13-26页 |
| ·病毒的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·形态特征 | 第13-14页 |
| ·病毒的生物多样性 | 第14页 |
| ·BVDV 基因组结构和功能 | 第14-18页 |
| ·BVDV 的5’-UTR 和3’-UTR | 第14-15页 |
| ·BVDV 的大开放阅读框架 | 第15-18页 |
| ·牛病毒性腹-泻黏膜病的类型与临床诊断 | 第18-20页 |
| ·急性感染 | 第18页 |
| ·先天性感染 | 第18-19页 |
| ·持续型感染 | 第19页 |
| ·黏膜病 | 第19-20页 |
| ·牛病毒性腹泻病原学检测方法进展 | 第20-22页 |
| ·病毒分离 | 第20页 |
| ·酶联免疫吸附试验检测病毒 | 第20页 |
| ·免疫组织化学 | 第20-21页 |
| ·免疫过氧化物酶（IP）技术 | 第21页 |
| ·电镜检查 | 第21页 |
| ·反转录-多聚酶链式反应（RT–PCR） | 第21-22页 |
| ·核酸杂交试验（NAH）技术 | 第22页 |
| ·牛病毒性腹泻病血清学检测方法进展 | 第22-23页 |
| ·病毒中和试验 | 第22页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第22-23页 |
| ·牛病毒性腹泻-黏膜病在我国的流行状况 | 第23-24页 |
| ·牛病毒性腹泻-黏膜病在我国的防制状况 | 第24-25页 |
| ·研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-36页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·病毒与细胞 | 第26页 |
| ·质粒与菌株 | 第26页 |
| ·标准血清及血清样本 | 第26页 |
| ·常用生物学试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白 NS3 分节段原核表达载体构建 | 第28-30页 |
| ·NS3a、NS3b 和 NS3c 蛋白的原核表达和鉴定 | 第30-31页 |
| ·NS3a、NS3b 和 NS3c 基因片段表达产物的 Western Blot 分析 | 第31页 |
| ·NS3b 基因片段原核表达蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·牛BVDV 抗体间接ELISA 检测方法的标准化 | 第32-33页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 特异性试验 | 第33-34页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 重复性试验 | 第34页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 与血清中和试验结果的对比 | 第34页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 与同类商品化试剂盒的对比 | 第34页 |
| ·黑龙江省部分奶牛场牛病毒性腹泻病毒感染血清学调查 | 第34-36页 |
| 3. 实验结果 | 第36-50页 |
| ·BVDV NS3a、NS3b 和 NS3c 基因片段重组表达载体的鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组质粒pET-30a-BVDV-NS3a 的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 pET-30a- BVDV-NS3b 的鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pET-30a-BVDV-NS3c 的鉴定 | 第37-38页 |
| ·BVDV NS3a、NS3b 和NS3c 基因片段在大肠杆菌中的表达 | 第38-41页 |
| ·重组质粒pET-30a-BVDV-NS3a 在E.coli 内表达的SDS-PAGE 检测 | 第38-39页 |
| ·重组质粒 pET-30a-BVDV-NS3b 在 E.coli 内表达的 SDS-PAGE 检测 | 第39页 |
| ·重组质粒pET-30a-BVDV-NS3c 在E.coli 内表达的SDS-PAGE 检测 | 第39-41页 |
| ·表达蛋白的Western-blotting 分析 | 第41页 |
| ·NS3b 基因片段原核表达蛋白的可溶性分析 | 第41页 |
| ·NS3b 基因片段表达产物的纯化分析 | 第41-43页 |
| ·牛BVDV 抗体间接ELISA 方法的建立 | 第43-46页 |
| ·抗原和被检血清最佳稀释度的测定 | 第43-44页 |
| ·包被缓冲液的选择 | 第44页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第44页 |
| ·最佳酶标抗体工作浓度的选择 | 第44-45页 |
| ·最佳被检血清和酶标抗体作用时间的选择 | 第45页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第45-46页 |
| ·最佳终止条件的选择 | 第46页 |
| ·BVDV 间接ELISA 临界值的确定及阳性结果的判定 | 第46页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 特异性检测 | 第46-47页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 重复性试验 | 第47页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 与血清中和试验结果的对比 | 第47页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 与同类商品化试剂盒的对比 | 第47-48页 |
| ·黑龙江省部分奶牛场牛病毒性腹泻病毒感染血清学调查 | 第48-50页 |
| ·4 个奶牛养殖场2006 年~2008 年BVDV 感染情况 | 第48-49页 |
| ·各奶牛养殖场BVDV 感染态势 | 第49-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-54页 |
| ·NS3 蛋白的原核表达 | 第50页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 检测方法反应条件的优化及性能探讨 | 第50-52页 |
| ·ELISA 反应条件的选择 | 第50-51页 |
| ·BVDV 抗体间接ELISA 检测方法性能的探讨 | 第51-52页 |
| ·黑龙江省部分奶牛场BVDV 感染情况 | 第52-54页 |
| 5. 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
