| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-37页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·哺乳动物生殖细胞的发生过程 | 第13-28页 |
| ·卵泡的发生过程与发育调控 | 第13-22页 |
| ·哺乳动物精子发生过程 | 第22-28页 |
| ·Kinesin 超家族蛋白(Kifs)及其在动物发育过程中的作用 | 第28-37页 |
| ·Kinesin 简介 | 第28-29页 |
| ·Kinesin 的基本结构与功能 | 第29-31页 |
| ·Kifs 的分类 | 第31-32页 |
| ·Kifs 在动物生殖与发育中的作用 | 第32-35页 |
| ·与Kifs 相关的疾病 | 第35-37页 |
| 第二章 小鼠 Oocyte-G1 基因的筛选、克隆及表达模式研究 | 第37-75页 |
| ·摘要 | 第37页 |
| ·简介 | 第37-39页 |
| ·实验材料与方法 | 第39-58页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·感受态细菌的制备与质粒转化 | 第39-40页 |
| ·实验动物选择 | 第40页 |
| ·DDRT-PCR | 第40-43页 |
| ·小鼠卵巢cDNA 文库筛选 | 第43-46页 |
| ·Oocyte-G1 基因的生物信息学分析 | 第46页 |
| ·非同位素标记探针的制备与Northern blot 分析 | 第46-50页 |
| ·体外细胞培养 | 第50页 |
| ·Oocyte-G1 抗血清的特异性检验 | 第50-53页 |
| ·真核哺乳动物细胞的脂质体法转染 | 第53页 |
| ·组织与细胞总蛋白的提取以及Western blot 试验方法 | 第53-56页 |
| ·免疫荧光组织化学分析 | 第56-57页 |
| ·数据分析与结果统计 | 第57-58页 |
| ·DNA 序列测定 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-69页 |
| ·Oocyte-G1 基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·Oocyte-G1 基因序列特征分析 | 第59-63页 |
| ·Oocyte-G1 在成年小鼠不同器官内的表达情况 | 第63-65页 |
| ·Oocyte-G1 抗血清的特异性检验和Oocyte-G1 蛋白的表达情况 | 第65-67页 |
| ·Oocyte-G1 在15 日龄和40 日龄的小鼠卵巢中高水平表达 | 第67-69页 |
| ·Oocyte-G1 的蛋白质定位于卵母细胞及其周围的颗粒细胞中 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 第三章 小鼠 Oocyte-G1 基因的功能及作用机理研究 | 第75-131页 |
| ·摘要 | 第75页 |
| ·简介 | 第75-77页 |
| ·实验材料与方法 | 第77-94页 |
| ·细胞培养与试剂 | 第77-78页 |
| ·实验动物选择 | 第78页 |
| ·质粒构建 | 第78-81页 |
| ·质粒抽提与纯化 | 第81-82页 |
| ·pFB-neo-Oocyte-G1 反转录病毒载体的体外包装 | 第82-83页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠的构建 | 第83-84页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第84页 |
| ·Oocyte-G1 转基因小鼠的PCR 筛选 | 第84-85页 |
| ·Southern blot 分析 | 第85-88页 |
| ·定量PCR(Quantitative PCR) | 第88-89页 |
| ·免疫组织化学 | 第89页 |
| ·TUNEL 法检测细胞早期凋亡现象 | 第89-91页 |
| ·流式细胞法检测细胞中的早期凋亡现象 | 第91页 |
| ·免疫沉淀 | 第91-92页 |
| ·细胞转染与稳定细胞株的构建 | 第92-93页 |
| ·细胞双色免疫荧光 | 第93-94页 |
| ·DNA 序列测定及其他常规试验方法 | 第94页 |
| ·实验结果 | 第94-126页 |
| ·Oocyte-G1 稳定过表达L 细胞株的建立 | 第94-97页 |
| ·Oocyte-G1 RNAi 干扰载体构建 | 第97-99页 |
| ·Oocyte-G1 过量表达能促进细胞中凋亡现象的发生 | 第99-103页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠的构建、筛选与鉴定 | 第103-107页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠表型分析 | 第107-109页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠中精子发生过程迟缓 | 第109-111页 |
| ·Oocyte-G1 过表达对卵泡发育过程产生影响 | 第111-112页 |
| ·Oocyte-G1 过表达模型小鼠内的精原细胞凋亡现象显著增加 | 第112-113页 |
| ·Oocyte-G1 过量表达未对其它器官发育过程产生显著影响 | 第113-115页 |
| ·Oocyte-G1 与Caspase-3 蛋白间的相互作用 | 第115-118页 |
| ·Oocyte-G1 与Caspase-3 的相互作用发生在细胞核周围区域 | 第118-119页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠中Caspase-3 表达量显著增高 | 第119-120页 |
| ·细胞内Oocyte-G1 表达量的改变能影响Caspase-3 的表达水平 | 第120-123页 |
| ·细胞内Oocyte-G1 表达量的改变对Bax/Bcl-2 表达水平的影响 | 第123-126页 |
| ·讨论 | 第126-130页 |
| ·Oocyte-G1 可能通过作用于 Caspase-3 而对细胞凋亡具有促进作用 | 第126-128页 |
| ·Oocyte-G1 过表达转基因小鼠的发育过程受到影响 | 第128-130页 |
| ·本章小结 | 第130-131页 |
| 第四章 全文总结 | 第131-133页 |
| ·主要结论 | 第131-132页 |
| ·研究展望 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-147页 |
| 附录一 符号与标记 | 第147-149页 |
| 附录二 材料与试剂 | 第149-152页 |
| 附录三 设备与仪器 | 第152-153页 |
| 附录四 常用试剂配方 | 第153-157页 |
| 附录五 核酸序列测定结果 | 第157-165页 |
| 致谢 | 第165-167页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第167-168页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第168页 |
