| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 第1节 氨基糖苷类抗生素的研究背景 | 第16-21页 |
| ·氨基糖苷类抗生素的概况 | 第16-17页 |
| ·含C7N 结构的氨基糖苷类抗生素 | 第17-19页 |
| ·阿卡波糖生物合成途径的研究进展 | 第19-21页 |
| 第2节 井冈霉素的重要生物活性 | 第21-27页 |
| ·井冈霉素的重要生物活性 | 第21-22页 |
| ·井冈霉素的化学性质 | 第22-23页 |
| ·井冈霉素生物合成途径的化学研究背景 | 第23-27页 |
| 第3节 几种井冈霉素衍生物的研究进展 | 第27-29页 |
| ·有效烯胺的化学合成 | 第27-28页 |
| ·1, 1'-双-有效烯胺和1, 1'-双-2-表-有效烯胺的化学合成 | 第28-29页 |
| 第4节 井冈霉素合成基因簇的前期研究 | 第29-34页 |
| ·吸水链霉菌 5008 中发现的井冈霉素合成基因簇 | 第29-33页 |
| ·吸水链霉菌柠檬变种 KCCM 11405 中发现的井冈霉素合成基因簇 | 第33-34页 |
| 第5节 本研究的内容和目的 | 第34-36页 |
| ·本研究的基础 | 第34-35页 |
| ·本研究的内容 | 第35页 |
| ·本研究的目的 | 第35-36页 |
| 第二章 井冈霉素合成基因簇的异源表达 | 第36-60页 |
| 第1节 材料与方法 | 第36-48页 |
| ·菌株 | 第36-37页 |
| ·质粒 | 第37-42页 |
| ·培养基和化学试剂 | 第42-45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| 第2节 井冈霉素合成基因簇在链霉菌中的表达 | 第48-55页 |
| ·井冈霉素合成基因簇在吸水链霉菌 5008 突变株中的表达 | 第48-50页 |
| ·井冈霉素合成基因簇在变铅青链霉菌 1326 中的表达 | 第50-53页 |
| ·井冈霉素生物合成基因簇在变铅青链霉菌 T7 中的表达 | 第53-55页 |
| 第3节 井冈霉素合成基因簇在大肠杆菌中的表达 | 第55-60页 |
| ·构建载体 pJTU780(改造后的 pRSET B) | 第55-56页 |
| ·以 pJTU780 为载体表达单个或多个蛋白 | 第56-58页 |
| ·井冈霉素基因簇在大肠杆菌中表达的构建 | 第58-60页 |
| 第三章 2-表-5-表有效醇酮表异构酶ValD 的功能研 | 第60-74页 |
| 第1节 材料与方法 | 第60-64页 |
| ·质粒 | 第60-62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| 第2节 ValD 催化活性的体外功能分析 | 第64-67页 |
| ·ValA 和ValD 的偶联反应 | 第64-65页 |
| ·ValD 催化活性的NMR 监控 | 第65-67页 |
| 第3节 ValD 蛋白的结构分析和对金属离子的选择性 | 第67-74页 |
| ·ValD 与其它同源蛋白的序列比对 | 第67-68页 |
| ·ValD 的N 端蛋白和C 端蛋白的酶活分析 | 第68页 |
| ·ValD 点突变蛋白的酶活分析 | 第68-70页 |
| ·ValD 对金属离子的选择性 | 第70页 |
| ·ValD 的催化机理 | 第70-71页 |
| ·ValD 的蛋白结构分析 | 第71-74页 |
| 第四章 对氧化还原酶 ValN 的研究和新产物 1, 1'-双-有效烯胺 和有效烯霉素的产生 | 第74-93页 |
| 第1节 材料与方法 | 第74-76页 |
| ·菌株 | 第74页 |
| ·质粒 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| 第2节 氧化还原酶 ValN 的体外表达及酶活实验 | 第76-78页 |
| ·氧化还原酶ValN 的功能分析 | 第76-77页 |
| ·ValN 的体外表达及酶活分析 | 第77-78页 |
| 第3节 吸水链霉菌5008 中valN 缺失突变株的构建及新产物1,1'-双-有效烯胺和有效烯霉素的结构鉴定 | 第78-93页 |
| ·valN 缺失突变株XH-2 的构建 | 第78-80页 |
| ·XH-2 的新产物1,1'-双-有效烯胺和有效烯霉素 | 第80页 |
| ·1,1'-双-有效烯胺和有效烯霉素的结构鉴定 | 第80-91页 |
| ·1,1'-双-有效烯胺和有效烯霉素的生物活性检测 | 第91-93页 |
| 第五章 氨基转移酶 ValM 的功能 | 第93-98页 |
| 第1节 氨基转移酶ValM 的体外表达及酶活测定 | 第93-94页 |
| ·氨基转移酶ValM 的体内功能分析 | 第93-94页 |
| ·ValM 的体外表达及酶活测定 | 第94页 |
| 第2节 吸水链霉菌5008 中valM 缺失突变株的构建及发酵产物分析 | 第94-98页 |
| ·valM 缺失突变株XH-1 的构建 | 第94-95页 |
| ·XXH-1 发酵产物的分析析 | 第95-98页 |
| 第六章 核苷酸转移酶ValB 及其同源蛋白AcbR 的功能研 | 第98-104页 |
| 第1节 实验方法 | 第98-99页 |
| 第2节 ValB 的体外酶活分析 | 第99-101页 |
| ·ValB 的体外酶活实验 | 第99-101页 |
| ·ValB 酶活反应条件的优化 | 第101页 |
| 第3节 AcbR 的体外酶活分析 | 第101-104页 |
| ·AcbR 的体外酶活实验 | 第101-102页 |
| ·AAcbR 酶活活反应条件的的优化 | 第102-104页 |
| 第七章 糖基转移酶ValG 的酶活分析和4"-表-井冈霉素A 的体外合成 | 第104-117页 |
| 第1节 ValG 对不同UDP-糖基供体的利用 | 第105-106页 |
| 第2节 4"-表-井冈霉素A 的结构鉴定和生物活性检测 | 第106-113页 |
| ·4"-表-井冈霉素A 的化学性质和结构鉴定 | 第106-112页 |
| ·4"-表-井冈霉素A 的生物活性检测 | 第112-113页 |
| 第3节 ValG 的定点突变及对其催化活性的影响 | 第113-117页 |
| ·ValG 的定点突变 | 第113-115页 |
| ·定点突变((DTG-DCCD)对 VallG 催化活性性的影响 | 第115-117页 |
| 第八章 总结与展望 | 第117-123页 |
| 第1节 工作总结 | 第117-120页 |
| 第2节 主要创新点 | 第120-121页 |
| 第3节 前景和展望 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-128页 |
| 攻读学位期间发表学术论文和申请发明专利 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
