摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
第一章 综述核质运输及其结构生物学 | 第12-39页 |
·引言 | 第12-13页 |
·KARYOPHERIN 蛋白家族 | 第13-14页 |
·入核转运(NUCLEAR IMPORT) | 第14-22页 |
·Importin β介导的入核转运 | 第14-21页 |
·Transportin 介导的入核转运 | 第21-22页 |
·出核转运(NUCLEAR EXPORT) | 第22-27页 |
·Cse1 介导的Importin α的出核转运 | 第22-24页 |
·Crm1 介导的NES 的出核转运 | 第24-25页 |
·Xpot 介导的tRNA 的出核转运 | 第25-27页 |
·Ran 的循环 | 第27-31页 |
·RanGAP 催化GTP 的水解 | 第27-29页 |
·RCC1 介导核苷酸交换 | 第29-30页 |
·RanGDP 的循环入核 | 第30-31页 |
·核孔蛋白 | 第31-33页 |
参考文献 | 第33-39页 |
第二章 Prp20p 的晶体结构及其与 Gsp1p 和 Histone 的结合 | 第39-96页 |
·Prp20p 的背景功能介绍 | 第39-50页 |
·RCC1/Prp20p 的发现 | 第39页 |
·RCC1/Prp20p 的功能简介 | 第39-45页 |
·RCC1 超家族及其结构研究进展 | 第45-50页 |
·实验材料和实验方法 | 第50-68页 |
·文献调研 | 第50页 |
·生物信息学调研 | 第50页 |
·引物设计 | 第50-52页 |
·PCR 反应 | 第52-53页 |
·PCR 产物的回收 | 第53页 |
·PCR 产物和表达载体的双酶切 | 第53-54页 |
·基因片段和载体的连接 | 第54-55页 |
·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及鉴定和测序 | 第55-56页 |
·初步的表达尝试 | 第56-57页 |
·构建点突变体 | 第57-59页 |
·制备实验用感受态细胞 | 第59-60页 |
·蛋白质的诱导表达 | 第60-61页 |
·蛋白质的Ni 亲和柱纯化 | 第61页 |
·利用分子筛进一步纯化蛋白 | 第61-62页 |
·已纯化蛋白的甲基化(Reductive Methylation) | 第62-63页 |
·用于晶体筛选的蛋白样品准备 | 第63-64页 |
·蛋白质结晶的初步筛选和优化 | 第64-65页 |
·晶体晶胞衍射相位的获得 | 第65-66页 |
·酵母组蛋白的表达及纯化 | 第66-67页 |
·酵母组蛋白的三种多聚体的重构 | 第67-68页 |
·GST Pull-down 实验 | 第68页 |
·实验结果与讨论 | 第68-89页 |
·Prp20p 的克隆片段的选择 | 第68-71页 |
·Prp20p 以及Gsp1p 的表达与纯化 | 第71-73页 |
·Prp20p 的晶体筛选 | 第73-74页 |
·晶体数据的收集以及结构解析和修正 | 第74-75页 |
·Prp20p 的晶体结构的描述 | 第75-78页 |
·与RCC1 超家族蛋白的结构比较(Structure comparison) | 第78-81页 |
·两个βwedge 都参与了Prp20p 与Gsp1p 的结合 | 第81-84页 |
·Prp20p 与Gsp1p 的复合物模型 | 第84-85页 |
·Prp20p 的组蛋白结合特性 | 第85-89页 |
·本章小结 | 第89-91页 |
参考文献 | 第91-96页 |
第三章 人源的 CSL 锌指蛋白 DESR1 的溶液结构 | 第96-119页 |
·DESR1 的背景功能介绍 | 第96-106页 |
·DESR1 的发现及其基因和蛋白特点 | 第96-97页 |
·DESR1 参与白喉酰胺(Diphthamide)的生物合成 | 第97-100页 |
·DESR1 在鼠的胚胎发育中的作用 | 第100-102页 |
·DESR1 在分泌过程中的作用 | 第102-104页 |
·酵母中的Kti11 的功能和结构 | 第104-106页 |
·实验材料和实验方法 | 第106-109页 |
·DESR1 的质粒的克隆 | 第106-107页 |
·DESR1 蛋白的表达与纯化 | 第107-108页 |
·蛋白质的浓度测定 | 第108页 |
·蛋白中锌的含量与配位 | 第108页 |
·DESR1 的同位素标记与NMR 实验 | 第108-109页 |
·数据处理与结构计算 | 第109页 |
·实验结果和讨论 | 第109-117页 |
·DESR1 的表达纯化 | 第109-111页 |
·DESR1 中的锌含量测定 | 第111页 |
·DESR1 的EXAFS 分析 | 第111-112页 |
·DESR1 的NMR 实验和结构计算 | 第112-114页 |
·DESR1 的结构描述与分析 | 第114-116页 |
·结构比较 | 第116-117页 |
·本章小结 | 第117-119页 |
参考文献 | 第119-122页 |
致谢 | 第122-123页 |
在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第123-124页 |