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酿酒酵母蛋白Prp20p以及人源锌指蛋白DESR1的结构与功能研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
第一章 综述核质运输及其结构生物学第12-39页
   ·引言第12-13页
   ·KARYOPHERIN 蛋白家族第13-14页
   ·入核转运(NUCLEAR IMPORT)第14-22页
     ·Importin β介导的入核转运第14-21页
     ·Transportin 介导的入核转运第21-22页
   ·出核转运(NUCLEAR EXPORT)第22-27页
     ·Cse1 介导的Importin α的出核转运第22-24页
     ·Crm1 介导的NES 的出核转运第24-25页
     ·Xpot 介导的tRNA 的出核转运第25-27页
   ·Ran 的循环第27-31页
     ·RanGAP 催化GTP 的水解第27-29页
     ·RCC1 介导核苷酸交换第29-30页
     ·RanGDP 的循环入核第30-31页
   ·核孔蛋白第31-33页
 参考文献第33-39页
第二章 Prp20p 的晶体结构及其与 Gsp1p 和 Histone 的结合第39-96页
   ·Prp20p 的背景功能介绍第39-50页
     ·RCC1/Prp20p 的发现第39页
     ·RCC1/Prp20p 的功能简介第39-45页
     ·RCC1 超家族及其结构研究进展第45-50页
   ·实验材料和实验方法第50-68页
     ·文献调研第50页
     ·生物信息学调研第50页
     ·引物设计第50-52页
     ·PCR 反应第52-53页
     ·PCR 产物的回收第53页
     ·PCR 产物和表达载体的双酶切第53-54页
     ·基因片段和载体的连接第54-55页
     ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及鉴定和测序第55-56页
     ·初步的表达尝试第56-57页
     ·构建点突变体第57-59页
     ·制备实验用感受态细胞第59-60页
     ·蛋白质的诱导表达第60-61页
     ·蛋白质的Ni 亲和柱纯化第61页
     ·利用分子筛进一步纯化蛋白第61-62页
     ·已纯化蛋白的甲基化(Reductive Methylation)第62-63页
     ·用于晶体筛选的蛋白样品准备第63-64页
     ·蛋白质结晶的初步筛选和优化第64-65页
     ·晶体晶胞衍射相位的获得第65-66页
     ·酵母组蛋白的表达及纯化第66-67页
     ·酵母组蛋白的三种多聚体的重构第67-68页
     ·GST Pull-down 实验第68页
   ·实验结果与讨论第68-89页
     ·Prp20p 的克隆片段的选择第68-71页
     ·Prp20p 以及Gsp1p 的表达与纯化第71-73页
     ·Prp20p 的晶体筛选第73-74页
     ·晶体数据的收集以及结构解析和修正第74-75页
     ·Prp20p 的晶体结构的描述第75-78页
     ·与RCC1 超家族蛋白的结构比较(Structure comparison)第78-81页
     ·两个βwedge 都参与了Prp20p 与Gsp1p 的结合第81-84页
     ·Prp20p 与Gsp1p 的复合物模型第84-85页
     ·Prp20p 的组蛋白结合特性第85-89页
   ·本章小结第89-91页
 参考文献第91-96页
第三章 人源的 CSL 锌指蛋白 DESR1 的溶液结构第96-119页
   ·DESR1 的背景功能介绍第96-106页
     ·DESR1 的发现及其基因和蛋白特点第96-97页
     ·DESR1 参与白喉酰胺(Diphthamide)的生物合成第97-100页
     ·DESR1 在鼠的胚胎发育中的作用第100-102页
     ·DESR1 在分泌过程中的作用第102-104页
     ·酵母中的Kti11 的功能和结构第104-106页
   ·实验材料和实验方法第106-109页
     ·DESR1 的质粒的克隆第106-107页
     ·DESR1 蛋白的表达与纯化第107-108页
     ·蛋白质的浓度测定第108页
     ·蛋白中锌的含量与配位第108页
     ·DESR1 的同位素标记与NMR 实验第108-109页
     ·数据处理与结构计算第109页
   ·实验结果和讨论第109-117页
     ·DESR1 的表达纯化第109-111页
     ·DESR1 中的锌含量测定第111页
     ·DESR1 的EXAFS 分析第111-112页
     ·DESR1 的NMR 实验和结构计算第112-114页
     ·DESR1 的结构描述与分析第114-116页
     ·结构比较第116-117页
   ·本章小结第117-119页
参考文献第119-122页
致谢第122-123页
在读期间发表的学术论文与取得的研究成果第123-124页

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