| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 主要符号对照表 | 第19-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-29页 |
| 1.1 类黄酮次生代谢产物的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.1.1 类黄酮次生代谢产物在植物呈色中的作用研究 | 第20页 |
| 1.1.2 类黄酮生物合成途径关键酶基因及其功能研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2 丹参的研究概述 | 第25-26页 |
| 1.2.1 丹参和白花丹参 | 第25页 |
| 1.2.2 丹参次生代谢产物的研究进展 | 第25页 |
| 1.2.3 丹酚酸生物合成的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3 类黄酮和非类黄酮分支途径crosstalk的研究进展 | 第26页 |
| 1.4 调控类黄酮和酚酸合成的转录因子的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的内容和目的意义 | 第27-28页 |
| 1.6 本研究的创新点 | 第28页 |
| 1.7 本研究的技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 丹参类黄酮合成途径关键酶基因的克隆与分析 | 第29-42页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料、试剂与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1 材料 | 第29页 |
| 2.2.2 试剂和工具酶 | 第29页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 丹参总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.2 丹参c DNA模板的合成 | 第30页 |
| 2.3.3 类黄酮结构基因同源片段的获得 | 第30-31页 |
| 2.3.4 五个类黄酮关键酶基因全长的获得 | 第31-32页 |
| 2.3.5 生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-40页 |
| 2.4.1 丹参花瓣总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.4.2 丹参类黄酮结构基因的同源片段的获得 | 第32页 |
| 2.4.3 丹参类黄酮结构基因ORF的获得 | 第32-33页 |
| 2.4.4 类黄酮结构基因的序列分析 | 第33-40页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 类黄酮合成相关基因在丹参和白花丹参中的时空表达模式 | 第42-56页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料、试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.1 材料 | 第42-43页 |
| 3.2.2 试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 仪器 | 第43页 |
| 3.3 方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 丹参和白花丹参花青素成分的分析 | 第43页 |
| 3.3.2 类黄酮合成相关基因在丹参和白花丹参中的组织特异性 | 第43-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-53页 |
| 3.4.1 丹参和白花丹参花瓣总花青素含量的比较 | 第45-46页 |
| 3.4.2 类黄酮合成相关基因在丹参和白花丹参中的组织特异性表达模式 | 第46-50页 |
| 3.4.3 类黄酮相关基因在丹参和白花丹参花发育进程中的表达模式的比较分析 | 第50-53页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第53-56页 |
| 3.5.1 SmANS是丹参和白花丹参颜色表型差异的最为关键的因子 | 第53-54页 |
| 3.5.2 SmANS、SmF3'5'H和 SmFNSⅡ是白花丹参黄-蓝紫色相间的花粉着色的关键因子 | 第54页 |
| 3.5.3 类黄酮结构基因受转录因子的调控 | 第54-55页 |
| 3.5.4 类黄酮合成相关基因的共同协作决定不同丹参不同组织的呈色 | 第55-56页 |
| 第四章 丹参类黄酮途径关键酶基因的亚细胞定位分析 | 第56-73页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 材料、试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 4.2.1 材料 | 第56页 |
| 4.2.2 菌株与载体 | 第56页 |
| 4.2.3 试剂 | 第56-57页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-62页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第57页 |
| 4.3.2 类黄酮结构基因-pA7-GFP融合荧光表达载体的构建 | 第57-59页 |
| 4.3.3 重组载体的菌落PCR鉴定 | 第59页 |
| 4.3.4 酶切鉴定 | 第59页 |
| 4.3.5 目的基因-pA7-pCAMBIA0390重组载体的构建 | 第59-61页 |
| 4.3.6 目的基因-pA7-pCAMBIA0390的根癌农杆菌EH105 的转化 | 第61页 |
| 4.3.7 根癌农杆菌EH105 介导的烟草叶片的瞬时转化 | 第61-62页 |
| 4.4 实验结果 | 第62-71页 |
| 4.4.1 绿色荧光蛋白融合表达载体的构建 | 第62-67页 |
| 4.4.2 重组质粒在烟草叶片表皮细胞中的瞬时表达 | 第67-71页 |
| 4.5 小节与讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 丹参SmANS在丹参和白花丹参类黄酮合成积累中的作用 | 第73-98页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 材料、试剂与仪器 | 第73-74页 |
| 5.2.1 材料 | 第73页 |
| 5.2.2 菌株与载体 | 第73-74页 |
| 5.2.3 试剂 | 第74页 |
| 5.2.4 培养基 | 第74页 |
| 5.2.5 主要仪器 | 第74页 |
| 5.3 实验方法 | 第74-80页 |
| 5.3.1 丹参和白花丹参无菌苗的获得和扩繁 | 第74页 |
| 5.3.2 丹参SmANS基因过表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 5.3.3 SmANS-RNAi载体的构建 | 第76-78页 |
| 5.3.4 SmANS过表达和RNAi重组质粒和空载质粒的根癌农杆菌转化 | 第78页 |
| 5.3.5 农杆菌介导的植物遗传转化以及转基因丹参与白花丹参株系的获得 | 第78-79页 |
| 5.3.6 SmANS过表达和沉默植株的分子鉴定 | 第79页 |
| 5.3.7 丹参类黄酮、酚酸和原花青素成分的测定 | 第79-80页 |
| 5.3.8 qRT-PCR分析相关基因的相对表达水平 | 第80页 |
| 5.3.9 数据分析 | 第80页 |
| 5.4 实验结果 | 第80-95页 |
| 5.4.1 丹参SmANS基因过表载体的构建 | 第80-82页 |
| 5.4.2 丹参SmANS-RNAi表达载体的构建 | 第82-86页 |
| 5.4.3 SmANS过表达和RNAi的转基因植株的分子鉴定 | 第86页 |
| 5.4.4 过表达SmANS的丹参和白花丹参株系的获得 | 第86-94页 |
| 5.4.5 SmANS沉默对丹参类黄酮成分和相关基因表达的的影响 | 第94-95页 |
| 5.5 小节与讨论 | 第95-98页 |
| 5.5.1 SmANS的在丹参和白花丹参的颜色形成中起最为关键的―开关‖作用 | 第95-96页 |
| 5.5.2 SmANS诱导的类黄酮支路与丹酚酸支路的crosstalk | 第96页 |
| 5.5.3 SmANS诱导的花青素分支与原花青素分支的crosstalk | 第96页 |
| 5.5.4 SmANS受到转录因子SmMYB36 的负调控 | 第96-97页 |
| 5.5.5 总结 | 第97-98页 |
| 第六章 SmF3'H基因在丹参类黄酮合成积累中的作用 | 第98-112页 |
| 6.1 引言 | 第98页 |
| 6.2 材料、时间与仪器 | 第98-99页 |
| 6.2.1 材料 | 第98页 |
| 6.2.2 菌株与载体 | 第98页 |
| 6.2.3 试剂 | 第98页 |
| 6.2.4 培养基 | 第98-99页 |
| 6.2.5 主要仪器 | 第99页 |
| 6.3 实验方法 | 第99-100页 |
| 6.3.1 丹参SmF3'H过表达载体的构建 | 第99-100页 |
| 6.3.2 SmF3'H-RNAi载体的构建 | 第100页 |
| 6.3.3 SmF3'H过表达和RNAi的丹参转基因植株的获得以及成分的测定 | 第100页 |
| 6.4 结果 | 第100-109页 |
| 6.4.1 丹参SmF3'H过表达载体的构建 | 第100-101页 |
| 6.4.2 SmF3'H-RNAi表达载体的构建 | 第101-102页 |
| 6.4.3 SmF3'H过表达和RNAi转基因植株的分子鉴定 | 第102-103页 |
| 6.4.4 过表达和沉默SmF3'H对丹参花青素和酚酸类成分积累的影响 | 第103-109页 |
| 6.5 小节与讨论 | 第109-112页 |
| 6.5.1 SmF3'H过表达或沉默改变了类黄酮的成分与含量 | 第109-110页 |
| 6.5.2 SmF3'H与其它类黄酮结构基因协同作用 | 第110页 |
| 6.5.3 SmF3'H影响类黄酮与丹酚酸支路的crosstalk | 第110-111页 |
| 6.5.4 总结 | 第111-112页 |
| 第七章 结论与展望 | 第112-115页 |
| 7.1 本研究获得的主要结论 | 第112-113页 |
| 7.2 研究展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 附录A 进化树构建所需的相关蛋白 | 第127-131页 |
| 附录B 实验结果附图 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简介 | 第133页 |
