| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 狂犬病的流行病学 | 第14-15页 |
| 1.2 狂犬病的临床症状 | 第15页 |
| 1.3 RABV致病机理 | 第15-17页 |
| 1.3.1 RABV感染CNS造成的结构损伤及其机制 | 第15-17页 |
| 1.3.2 RABV造成神经功能紊乱的机制 | 第17页 |
| 1.4 RABV分子病原学 | 第17-19页 |
| 1.5 RABV的入侵过程 | 第19-20页 |
| 1.6 RABV受体研究进展 | 第20-24页 |
| 1.6.1 尼古丁乙酰胆碱受体 | 第20-21页 |
| 1.6.2 神经细胞粘连分子受体 | 第21-22页 |
| 1.6.3 低亲和力的神经生长因子受体 | 第22-23页 |
| 1.6.4 其它可能受体 | 第23-24页 |
| 1.7 代谢型谷氨酸受体研究进展 | 第24-27页 |
| 1.7.1 mGluRs分类 | 第24页 |
| 1.7.2 mGluRs的结构 | 第24-26页 |
| 1.7.3 mGluR2的生理功能及其相关的神经性疾病 | 第26-27页 |
| 1.7.4 mGluRs激活的下游信号以及内吞过程的研究进展 | 第27页 |
| 1.8 本研究目的意义 | 第27-28页 |
| 第二章 mGluR2在RABV入侵宿主细胞过程中发挥作用的鉴定 | 第28-44页 |
| 2.1 材料和方法 | 第28-34页 |
| 2.1.1 细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 载体质粒和病毒 | 第28页 |
| 2.1.3 抗体、可溶性蛋白和siRNA | 第28页 |
| 2.1.4 其它试剂耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第29-30页 |
| 2.1.7 不同物种mGluR2同源性分析 | 第30页 |
| 2.1.8 病毒的制备和滴定 | 第30页 |
| 2.1.9 RNA干扰试验 | 第30-31页 |
| 2.1.10 siRNA细胞毒性检测试验 | 第31页 |
| 2.1.11 Trizol法提取细胞总RNA | 第31页 |
| 2.1.12 荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第31-32页 |
| 2.1.13 间接免疫荧光检测mGluR2-mCherry的表达 | 第32页 |
| 2.1.14 Western Blotting (WB)检测 | 第32页 |
| 2.1.15 WB检测mGluR2-mCherry的表达 | 第32-33页 |
| 2.1.16 激光共聚焦试验检测mGluR2-mCherry膜表面表达情况 | 第33页 |
| 2.1.17 细胞膜蛋白的提取及鉴定 | 第33页 |
| 2.1.18 过表达mGluR2后病毒生长曲线测定 | 第33-34页 |
| 2.2 结果 | 第34-42页 |
| 2.2.1 不同物种mGluR2相似性分析 | 第34-36页 |
| 2.2.2 沉默mGluR2抑制了ERA-eGFP在HEK-293 细胞中的复制 | 第36-37页 |
| 2.2.3 沉默mGluR2抑制了ERA-eGFP在N2a细胞中的复制 | 第37-38页 |
| 2.2.4 沉默mGluR2抑制了ERA-eGFP在SK-N-SH细胞中的复制 | 第38-39页 |
| 2.2.5 沉默mGluR2抑制了VSV-eGFP在HEK-293 细胞中的复制 | 第39-40页 |
| 2.2.6 过表达mGluR2-mCherry的验证 | 第40-41页 |
| 2.2.7 利用WB分析细胞膜表面mGluR2表达情况 | 第41页 |
| 2.2.8 过表达mGluR2-mCherry促进ERA-eGFP感染HEK-293 细胞 | 第41-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 mGluR2作为RABV入侵宿主细胞受体的鉴定 | 第44-63页 |
| 3.1 材料和方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 质粒和病毒 | 第44页 |
| 3.1.2 抗体和试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第44页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.1.5 检测细胞沉淀中的蛋白互作 | 第45页 |
| 3.1.6 pGEX-4T-mGluR2和p ET-28a-ERAG重组表达载体的构建 | 第45页 |
| 3.1.7 mGluR2-GST与ERAG-His的可溶性表达 | 第45-46页 |
| 3.1.8 可溶性重组蛋白的纯化 | 第46页 |
| 3.1.9 纯化蛋白的浓度的检测 | 第46页 |
| 3.1.10 验证蛋白间存在直接相互作用 | 第46页 |
| 3.1.11 小鼠大脑皮层原代神经元细胞的制备培养 | 第46-47页 |
| 3.1.12 抗体阻断病毒感染试验 | 第47页 |
| 3.1.13 抗体竞争性Pulldown试验 | 第47页 |
| 3.1.14 可溶性蛋白体外中和病毒感染试验 | 第47-48页 |
| 3.1.15 mGluR2-GST中和病毒感染小鼠试验 | 第48页 |
| 3.2 结果 | 第48-62页 |
| 3.2.1 ERAG与mGluR2之间存在相互作用 | 第48-49页 |
| 3.2.2 RABV强毒株和街毒株囊膜糖与mGluR2之间存在相互作用 | 第49-50页 |
| 3.2.3 mGluR2与RABV G蛋白的相互作用具有种属特异性 | 第50-51页 |
| 3.2.4 mGluR2-GST和ERAG-His诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第51页 |
| 3.2.5 mGluR2-GST和ERAG-His可溶性蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.6 RABVG蛋白与mGluR2存在直接的相互作用 | 第52-54页 |
| 3.2.7 针对mGluR2抗体阻断ERA-eGFP感染HEK-293 细胞 | 第54-55页 |
| 3.2.8 针对mGluR2抗体阻断ERA-eGFP感染神经细胞 | 第55-57页 |
| 3.2.9 针对mGluR2抗体阻断ERA-eGFP体外感染的机制 | 第57-58页 |
| 3.2.10 mGluR2可溶性蛋白封闭ERA体外感染 | 第58-61页 |
| 3.2.11 mGluR2可溶性蛋白封闭GX09街毒株体内感染试验 | 第61-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 RABV利用mGluR2进行内吞的机制研究 | 第63-73页 |
| 4.1 材料和方法 | 第63-65页 |
| 4.1.1 病毒 | 第63页 |
| 4.1.2 抗体试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第63页 |
| 4.1.4 检测RABV感染对于细胞表面mGluR2表达水平的影响 | 第63-64页 |
| 4.1.5 检测RABV与mGluR2在HEK293中共定位 | 第64页 |
| 4.1.6 酸性条件下mGluR2与ERA G蛋白之间的互作 | 第64页 |
| 4.1.7 检测沉默 β-arrestins2基因表达对RABV感染HEK-293 的影响 | 第64页 |
| 4.1.8 体外感染RABV后检测胞内c AMP的变化 | 第64页 |
| 4.1.9 mGluR2激活剂和抑制剂对于RABV体外感染的影响 | 第64-65页 |
| 4.2 结果 | 第65-70页 |
| 4.2.1 RABV感染促进了mGluR2的内吞 | 第65-66页 |
| 4.2.2 RABV与mGluR2在早期和晚期内吞体中发生共定位 | 第66-68页 |
| 4.2.3 沉默 β-arrestins2基因表达促进RABV感染HEK-293 | 第68页 |
| 4.2.4 感染RABV对于胞内c AMP浓度的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.5 mGluR2激活剂和抑制剂对于RABV体外感染的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 讨论 | 第70-73页 |
| 第五章 全文结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |
