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布鲁菌感染巨噬细胞免疫关键分子的鉴定及其分子机制研究

摘要第6-7页
abstract第7-8页
第一章 引言第16-26页
    1.1 布鲁菌病原学与致病机制第16-17页
        1.1.1 布鲁菌的病原学第16-17页
        1.1.2 布鲁菌致病机制第17页
    1.2 布鲁菌的免疫第17-21页
        1.2.1 布鲁菌感染引起的固有免疫第17-19页
        1.2.2 布鲁菌感染引起的适应性免疫第19-21页
    1.3 布鲁菌逃逸宿主的免疫第21-25页
        1.3.1 布鲁菌干扰固有免疫信号通路第21-22页
        1.3.2 布鲁菌调节适应性免疫第22-23页
        1.3.3 布鲁菌调节细胞的死亡第23-24页
        1.3.4 布鲁菌通过其他方式逃逸宿主免疫第24-25页
    1.4 本研究的目的和意义第25-26页
第二章 布鲁菌感染巨噬细胞的转录组测序及免疫关键分子鉴定第26-36页
    2.1 材料和方法第26-29页
        2.1.1 菌株,细胞系第26页
        2.1.2 相关试剂第26页
        2.1.3 相关溶液及试剂配制第26-27页
        2.1.4 主要仪器设备第27页
        2.1.5 布鲁菌感染条件的确立及转录组样本的准备第27页
        2.1.6 转录组测序结果分析第27页
        2.1.7 荧光定量PCR筛选布鲁菌逃逸免疫相关分子第27-29页
        2.1.8 数据统计与分析第29页
    2.2 实验结果第29-35页
        2.2.1 布鲁菌感染条件的确定第29-30页
        2.2.2 转录组生物信息学分析结果第30-34页
        2.2.3 筛选布鲁菌逃逸免疫的关键分子第34-35页
    2.3 讨论第35-36页
第三章 布鲁菌通过下调TXNIP蛋白来增强其胞内存活第36-59页
    3.1 材料和方法第36-46页
        3.1.1 菌株,质粒和细胞系第36-37页
        3.1.2 抗体与相关试剂第37页
        3.1.3 相关溶液及试剂配制第37页
        3.1.4 主要仪器设备第37-38页
        3.1.5 蛋白免疫印迹检测布鲁菌感染后巨噬细胞后TXNIP的表达变化第38页
        3.1.6 通过Crispr敲除TXNIP基因的细胞系第38-42页
        3.1.7 免疫荧光和菌落计数检测布鲁菌胞内存活第42-43页
        3.1.8 荧光定量PCR检测布鲁菌感染TXNIP~(+/-)RAW264.7 细胞后相关因子变化第43页
        3.1.9 蛋白免疫印迹检测布鲁菌感染TXNIP~(+/-)RAW264.7 细胞后相关蛋白表达第43页
        3.1.10 流式检测布鲁菌感染TXNIP~(+/-)RAW264.7 细胞后活性氧产生第43-44页
        3.1.11 Griess法检测布鲁菌感染TXNIP~(+/-)RAW264.7 细胞后一氧化氮产生第44页
        3.1.12 通过菌落计数检测原代细胞中TXNIP对布鲁菌胞内存活的影响第44-45页
        3.1.13 通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测小鼠体内TXNIP表达变化第45页
        3.1.14 数据统计与分析第45-46页
    3.2 实验结果第46-56页
        3.2.1 布鲁菌感染巨噬细胞后减弱TXNIP的表达,其下调表达依赖于活菌及Ⅳ分泌系统第46-47页
        3.2.2 缺失TXNIP后对布鲁菌的胞内存活的影响第47-48页
        3.2.3 缺失TXNIP对布鲁菌感染后相关蛋白表达和细胞因子的影响第48-49页
        3.2.4 布鲁菌通过减少巨噬细胞一氧化氮的产生来增强其胞内存活第49-50页
        3.2.5 布鲁菌通过减少巨噬细胞ROS的产生来增强其胞内存活第50-51页
        3.2.6 TXNIP的下调表达不依赖于IRE1-miR-17 通路第51-52页
        3.2.7 布鲁菌感染后通过NO来调节TXNIP的表达第52-53页
        3.2.8 iNOS/NO的表达依赖于布鲁菌的Ⅳ分泌系统第53-54页
        3.2.9 TXNIP在原代细胞和小鼠体内的表达第54-56页
    3.3 讨论第56-59页
第四章 布鲁菌通过上调HO-1蛋白表达来增强其胞内存活第59-73页
    4.1 材料和方法第59-63页
        4.1.1 菌株、质粒和细胞系第59页
        4.1.2 抗体与相关试剂第59-60页
        4.1.3 相关溶液及试剂配制第60页
        4.1.4 主要仪器设备第60页
        4.1.5 蛋白免疫印迹检测布鲁菌感染后巨噬细胞后HO-1 及相关蛋白的表达第60页
        4.1.6 通过Crispr敲除HMOX1(HO-1),Nfe2l2(Nrf2)基因的细胞系第60-61页
        4.1.7 菌落计数检测布鲁菌胞内存活第61页
        4.1.8 药物抑制HO-1 蛋白活性后检测布鲁菌胞内存活第61页
        4.1.9 荧光定量PCR检测布鲁菌感染HO-1~(+/-)RAW264.7 细胞后相关因子变化第61页
        4.1.10 蛋白免疫印迹检测抑制或敲除上游相关分子后HO-1 蛋白表达第61-62页
        4.1.11 通过荧光定量PCR,蛋白免疫印迹和ELISA检测原代细胞及小鼠体内HO-1表达变化第62页
        4.1.12 数据统计与分析第62-63页
    4.2 实验结果第63-70页
        4.2.1 布鲁菌感染巨噬细胞后增强HO-1 及相关蛋白的表达第63-64页
        4.2.2 布鲁菌通过脂多糖(LPS)来上调表达HO-1 及相关蛋白第64-65页
        4.2.3 布鲁菌通过细胞内AMPK,PI-3K通路来调节HO-1 的表达第65-66页
        4.2.4 缺失或抑制HO-1,Nrf2 蛋白表达后减弱布鲁菌在巨噬细胞的存活第66-67页
        4.2.5 缺失HO-1,Nrf2 后对布鲁菌感染巨噬细胞后活性氧氮产生的影响第67-68页
        4.2.6 布鲁菌在原代细胞上调表达HO-1 以利于其胞内存活第68-69页
        4.2.7 HO-1 在小鼠体内的表达变化第69-70页
    4.3 讨论第70-73页
第五章 布鲁菌通过上调PRDX5 蛋白表达来增强其胞内存活第73-81页
    5.1 材料和方法第73-75页
        5.1.1 菌株、质粒和细胞系第73页
        5.1.2 抗体与相关试剂第73-74页
        5.1.3 相关溶液及试剂配制第74页
        5.1.4 主要仪器设备第74页
        5.1.5 蛋白免疫印迹检测布鲁菌感染后巨噬细胞后Prdx5 蛋白表达第74页
        5.1.6 通过Crispr敲除Prdx5 基因的细胞系第74页
        5.1.7 菌落计数检测布鲁菌胞内存活第74页
        5.1.8 布鲁菌通过减少巨噬细胞活性氧的产生来增强其胞内存活第74-75页
        5.1.9 布鲁菌通过减少巨噬细胞一氧化氮的产生来增强其胞内存活第75页
        5.1.10 通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测小鼠体内Prdx5 表达变化第75页
        5.1.11 数据统计与分析第75页
    5.2 实验结果第75-79页
        5.2.1 布鲁菌感染巨噬细胞后通过LPS增强Prdx5 蛋白的表达第75-77页
        5.2.2 缺失Prdx5 后对布鲁菌的胞内存活的影响第77页
        5.2.3 布鲁菌通过上调Prdx5 减少巨噬细胞活性氧氮的产生第77-78页
        5.2.4 Prdx5 在原代细胞和小鼠体内的表达变化第78-79页
    5.3 讨论第79-81页
第六章 全文结论第81-82页
参考文献第82-92页
致谢第92-93页
作者简历第93页

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