| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-35页 |
| 1.1 木质纤维素结构 | 第18-19页 |
| 1.2 半纤维素降解酶系及其协同酶解 | 第19-33页 |
| 1.2.1 半纤维素酶协同酶解 | 第20页 |
| 1.2.2 乙酰木聚糖酯酶 | 第20-27页 |
| 1.2.3 阿魏酸酯酶 | 第27-30页 |
| 1.2.4 内切β-1,4-木聚糖酶 | 第30-33页 |
| 1.3 本论文的研究意义、目的及主要内容 | 第33-35页 |
| 第二章 乙酰木聚糖酯酶克隆表达及应用研究 | 第35-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.3 培养基及有关溶液的配制 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-48页 |
| 2.2.1 黑曲霉BE-2总RNA提取及反转录 | 第37-38页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.3 乙酰木聚糖酯酶基因克隆及序列分析 | 第39-40页 |
| 2.2.4 乙酰木聚糖酯酶重组表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.5 重组表达载体转化毕赤酵母 | 第41-43页 |
| 2.2.6 毕赤酵母转化子筛选 | 第43页 |
| 2.2.7 重组酶的表达 | 第43-44页 |
| 2.2.8 重组酶的蛋白浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| 2.2.9 乙酰木聚糖酯酶酶活测定 | 第45-47页 |
| 2.2.10 乙酰木聚糖酯酶酶学性质研究 | 第47页 |
| 2.2.11 AnAxe和其它半纤维素酶协同酶解竹生物质的研究 | 第47-48页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第48-59页 |
| 2.3.1 黑曲霉BE-2总RNA的提取及反转录 | 第48-49页 |
| 2.3.2 乙酰木聚糖酯酶基因克隆及序列分析 | 第49-50页 |
| 2.3.3 毕赤酵母表达载体pPIC9K-AnAxe的构建 | 第50-51页 |
| 2.3.4 毕赤酵母转化子的鉴定 | 第51页 |
| 2.3.5 重组酶的表达 | 第51-52页 |
| 2.3.6 表达产物的蛋白浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第52页 |
| 2.3.7 乙酰木聚糖酯酶酶活性测定 | 第52-53页 |
| 2.3.8 乙酰木聚糖酯酶酶学性质分析 | 第53-55页 |
| 2.3.9 AnAxe与其它黑曲霉来源半纤维素酶协同酶解竹生物质研究 | 第55-59页 |
| 2.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 阿魏酸酯酶A基因的克隆与表达 | 第61-74页 |
| 3.1 实验材料 | 第61页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第61页 |
| 3.1.2 工具酶和试剂 | 第61页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第61页 |
| 3.1.4 培养基及有关溶液的配制 | 第61页 |
| 3.2 实验方法 | 第61-66页 |
| 3.2.1 黑曲霉RNA和及CDNA反转录 | 第61页 |
| 3.2.2 黑曲霉阿魏酸酯酶AcDNA的克隆及序列分析 | 第61-62页 |
| 3.2.3 重组表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.4 重组载体电转化进毕赤酵母及筛选鉴定 | 第63-64页 |
| 3.2.5 重组酶的表达与SDS-PAGE、蛋白含量测定 | 第64页 |
| 3.2.6 重组酶的酶活测定 | 第64-65页 |
| 3.2.7 重组酶的酶学性质表征 | 第65-66页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第66-72页 |
| 3.3.1 黑曲霉阿魏酸酯酶A CDNA的克隆表达及序列分析 | 第66-68页 |
| 3.3.2 重组酶的建模及结构分析 | 第68页 |
| 3.3.3 毕赤酵母重组子的构建 | 第68-69页 |
| 3.3.4 毕赤酵母表达载体电转化 | 第69-71页 |
| 3.3.5 重组阿魏酸酯酶A的酶学性质表征 | 第71-72页 |
| 3.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第四章 黑曲霉GH11家族木聚糖酶基因的克隆与表达 | 第74-87页 |
| 4.1 实验材料 | 第74页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第74页 |
| 4.1.2 工具酶与试剂 | 第74页 |
| 4.1.3 主要设备 | 第74页 |
| 4.1.4 培养基及有关溶液的配制 | 第74页 |
| 4.2 实验方法 | 第74-80页 |
| 4.2.1 黑曲霉BE-2总RNA提取及反转录 | 第74页 |
| 4.2.2 木聚糖酶基因克隆及序列分析 | 第74-75页 |
| 4.2.3 木聚糖酶重组表达载体的构建 | 第75-76页 |
| 4.2.4 重组表达载体转化毕赤酵母 | 第76-77页 |
| 4.2.5 毕赤酵母转化子筛选 | 第77页 |
| 4.2.6 重组酶的表达 | 第77页 |
| 4.2.7 重组酶的蛋白浓度及SDS-PAGE分析 | 第77页 |
| 4.2.8 木聚糖酶酶活测定 | 第77-79页 |
| 4.2.9 木聚糖酶酶学性质研究 | 第79-80页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第80-86页 |
| 4.3.1 AnXyn11A cDNA的克隆和序列分析 | 第80-81页 |
| 4.3.2 重组酶的建模及结构分析 | 第81-82页 |
| 4.3.3 重组表达载体的构建 | 第82页 |
| 4.3.4 毕赤酵母转化子的鉴定 | 第82-83页 |
| 4.3.5 重组酶AnXyn11A的蛋白浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第83-84页 |
| 4.3.6 重组酶AnXyn11A的酶活测定 | 第84页 |
| 4.3.7 重组酶AnXyn11A的酶学性质研究 | 第84-86页 |
| 4.4 本章小结 | 第86-87页 |
| 第五章 木聚糖酶和阿魏酸酯酶协同酶解麦麸研究 | 第87-95页 |
| 5.1 材料 | 第87-88页 |
| 5.1.1 菌株和酶液 | 第87页 |
| 5.1.2 材料与试剂 | 第87-88页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第88页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第88页 |
| 5.2 实验方法 | 第88-91页 |
| 5.2.1 酶解原料去淀粉麦麸(DSWB)的制备 | 第88页 |
| 5.2.2 总阿魏酸的提取 | 第88页 |
| 5.2.3 酶活测定 | 第88页 |
| 5.2.4 半纤维素酶协同酶解麦麸 | 第88-89页 |
| 5.2.5 阿魏酸的测定 | 第89-90页 |
| 5.2.6 低聚木糖的测定 | 第90-91页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第91-94页 |
| 5.3.1 去淀粉麦麸总阿魏酸含量的测定 | 第91页 |
| 5.3.2 AnFaeA水解DSWB的研究 | 第91页 |
| 5.3.3 AnFaeA和AnXyn11A协同水解DSWB的研究 | 第91-93页 |
| 5.3.4 AnAxe、AnFaeA和AnXyn11A协同水解DSWB的研究 | 第93页 |
| 5.3.5 作用时间对阿魏酸释放率的影响 | 第93-94页 |
| 5.4 本章小结 | 第94-95页 |
| 全文总结及展望 | 第95-97页 |
| 全文总结 | 第95-96页 |
| 展望 | 第96-97页 |
| 附录 主要实验仪器设备 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-113页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
