| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 产蛋鸡脂质代谢的研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1.1 蛋鸡肝脏VLDL的合成及转运 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蛋鸡卵泡的发育及蛋黄中脂蛋白的沉积 | 第15-16页 |
| 1.1.3 产蛋鸡脂质代谢的调控机制 | 第16-18页 |
| 1.1.3.1 脂肪酸合成过程的调控 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 脂蛋白组装、转运以及沉积过程的调控 | 第17-18页 |
| 1.2 微粒甘油体三酯转运蛋白的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 LLTPs脂质转运蛋白家族 | 第18-19页 |
| 1.2.2 MTTP的的起源 | 第19页 |
| 1.2.3 MTTP的结构及生物学活性研究 | 第19-20页 |
| 1.2.4 MTTP与脂质代谢的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.4.1 MTTP与脂质转运的关系 | 第20-21页 |
| 1.2.4.2 MTTP与含ApoB脂蛋白的关系 | 第21页 |
| 1.2.4.3 MTTP基因的调节 | 第21页 |
| 1.2.4.4 MTTP在鸡上的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 高通量测序的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.1 高通量测序的发展历程 | 第22页 |
| 1.3.2 高通量测序的应用 | 第22-24页 |
| 1.3.2.1 第二代高通量测序原理 | 第22页 |
| 1.3.2.2 高通量测序技术的应用 | 第22-24页 |
| 2 引言 | 第24-25页 |
| 3 鸡肝脏脂质转运关键基因的筛选 | 第25-34页 |
| 3.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 3.1.1 试验动物的选取及组织样品的采集 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 RNA的提取与质量检测 | 第25-26页 |
| 3.1.3.1 总RNA的提取 | 第25页 |
| 3.1.3.2 RNA质量检测 | 第25-26页 |
| 3.1.4 cDNA文库的构建和高通量测序 | 第26页 |
| 3.1.5 测序结果生物信息学分析 | 第26页 |
| 3.2 结果与分析 | 第26-32页 |
| 3.2.1 青年期与产蛋期卢氏鸡血清指标检测结果 | 第26-27页 |
| 3.2.2 总RNA提取和检测结果 | 第27页 |
| 3.2.3 新基因的筛选及功能域预测 | 第27-31页 |
| 3.2.4 MTTPL基因的筛选 | 第31-32页 |
| 3.3 讨论与小结 | 第32-33页 |
| 3.4 小结 | 第33-34页 |
| 4 MTTPL基因的克隆及生物信息学分析 | 第34-44页 |
| 4.1 试验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 样品采集 | 第34页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 4.1.3 主要试剂及配制 | 第34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| 4.2.2 总RNA的提取 | 第35页 |
| 4.2.3 RNA质量检测 | 第35页 |
| 4.2.4 反转录 | 第35-36页 |
| 4.2.5 PCR反应 | 第36页 |
| 4.2.6 PCR产物纯化回收及测序 | 第36-37页 |
| 4.2.7 生物信息学分析 | 第37页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第37-42页 |
| 4.3.1 MTTPLPCR产物检测结果 | 第37-38页 |
| 4.3.2 MTTPLPCR产物测序及比对结果 | 第38页 |
| 4.3.3 MTTPL基因序列拼接结果 | 第38-39页 |
| 4.3.4 生物信息学分析 | 第39-42页 |
| 4.3.4.1 结构域分析 | 第39-40页 |
| 4.3.4.2 序列比对分析 | 第40页 |
| 4.3.4.3 系统进化分析 | 第40-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 4.5 小结 | 第43-44页 |
| 5 MTTPL时空表达规律研究 | 第44-50页 |
| 5.1 试验材料 | 第44页 |
| 5.1.1 试验样品 | 第44页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第44页 |
| 5.1.3 主要试剂及配制方法 | 第44页 |
| 5.2 试验方法 | 第44-45页 |
| 5.2.1 总RNA的提取 | 第44页 |
| 5.2.2 RNA质量检测 | 第44页 |
| 5.2.3 反转录合成cDNA | 第44页 |
| 5.2.4 cDNA混池的制备 | 第44页 |
| 5.2.5 荧光定量PCR引物设计 | 第44-45页 |
| 5.2.6 荧光定量PCR反应 | 第45页 |
| 5.2.7 数据分析 | 第45页 |
| 5.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 5.3.1 总RNA质量检测 | 第45-46页 |
| 5.3.2 引物特异性检测 | 第46页 |
| 5.3.3 鸡MTTPL在不同组织中的表达规律 | 第46-47页 |
| 5.3.4 MTTPL及脂质转运关键基因在不同发育时期鸡肝脏组织的表达规律 | 第47页 |
| 5.3.5 ApoB、MTTPL及MTTP在不同发育时期鸡肾脏组织的表达规律 | 第47-48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-49页 |
| 5.5 小结 | 第49-50页 |
| 6 MTTPL基因的表达调控研究 | 第50-58页 |
| 6.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第50页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 6.1.3 试验主要试剂及配制 | 第50-51页 |
| 6.2 试验方法 | 第51-52页 |
| 6.2.1 血清的制备 | 第51页 |
| 6.2.2 鸡胚肝脏原代细胞的分离及培养 | 第51页 |
| 6.2.3 雌激素处理原代肝细胞试验设计 | 第51-52页 |
| 6.2.4 总RNA的提取 | 第52页 |
| 6.2.4.1 细胞总RNA的提取 | 第52页 |
| 6.2.4.2 组织总RNA的提取 | 第52页 |
| 6.2.5 细胞及组织总RNA质量检测 | 第52页 |
| 6.2.6 cDNA的合成 | 第52页 |
| 6.2.7 qRT-PCR引物设计 | 第52页 |
| 6.2.8 qRT-PCR反应 | 第52页 |
| 6.2.9 数据分析 | 第52页 |
| 6.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 6.3.1 细胞及组织总RNA质量检测 | 第52-53页 |
| 6.3.2 雌激素对肝细胞内MTTPL及脂质转运相关基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 6.3.2.1 细胞培养 | 第53页 |
| 6.3.2.2 雌激素对肝脏细胞内MTTPL以及脂质转运关键基因的表达的影响 | 第53-54页 |
| 6.3.3 雌激素对青年母鸡脂质代谢的影响 | 第54-57页 |
| 6.3.3.1 雌激素对血液指标的影响 | 第54页 |
| 6.3.3.2 雌激素对肝脏组织内MTTPL以及脂质转运关键基因的表达的影响 | 第54-55页 |
| 6.3.3.3 雌激素对肾脏组织内MTTPL以及脂质转运关键基因的表达的影响 | 第55-57页 |
| 6.4 讨论 | 第57页 |
| 6.5 小结 | 第57-58页 |
| 7 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| ABSTRACT | 第67-68页 |
