| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 天冬氨酸蛋白酶的研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 天冬氨酸蛋白酶家族成员及分布 | 第12页 |
| 1.1.2 天冬氨酸蛋白酶的结构特点 | 第12页 |
| 1.1.3 天冬氨酸蛋白酶的活化机制 | 第12-13页 |
| 1.1.4 动物主要天冬氨酸蛋白酶的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.4.1 胃蛋白酶 | 第13页 |
| 1.1.4.2 组织蛋白酶D | 第13-14页 |
| 1.1.4.3 组织蛋白酶E | 第14-15页 |
| 1.1.5 cathepsin E-A-like基因的发现及研究进展 | 第15页 |
| 1.2 雌激素和雌激素受体的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 雌激素概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 雌激素受体 | 第16-17页 |
| 1.2.2.1 雌激素经典的核受体ER和ERβ | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 新型雌激素受体GPR30 | 第17页 |
| 1.2.3 雌激素受体的信号转导途径 | 第17-20页 |
| 1.2.3.1 经典的配体依赖型途径 | 第17页 |
| 1.2.3.2 配体非依赖型途径 | 第17-18页 |
| 1.2.3.3 不依赖ERE的转录途径 | 第18页 |
| 1.2.3.4 快速的非基因组转导途径 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-21页 |
| 3 鸡cathepsin E-A-like基因的克隆及生物信息学分析 | 第21-35页 |
| 3.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 试验动物及样品采集 | 第21页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 3.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第21-22页 |
| 3.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 3.2.2 组织总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.2.3 RNA质量检测 | 第23页 |
| 3.2.4 反转录 | 第23页 |
| 3.2.5 cDNA质量检测 | 第23-24页 |
| 3.2.6 构建cDNA混池 | 第24页 |
| 3.2.7 目的基因PCR扩增 | 第24页 |
| 3.2.8 PCR产物纯化回收 | 第24-25页 |
| 3.2.9 PCR产物的测序及拼接 | 第25页 |
| 3.2.10 生物信息学分析 | 第25页 |
| 3.3 结果与分析 | 第25-32页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第25-26页 |
| 3.3.2 cDNA质量检测 | 第26页 |
| 3.3.3 鸡cathepsin E-A-like基因克隆引物特异性检测 | 第26-27页 |
| 3.3.4 鸡cathepsin E-A-like基因CDs序列的克隆和特性分析 | 第27页 |
| 3.3.5 鸡cathepsin E-A-like氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| 3.3.6 鸡cathepsin E-A-like蛋白结构域分析 | 第28-29页 |
| 3.3.7 鸡cathepsin E-A-like与cathepsin D和cathepsin E氨基酸序列一致性比对 | 第29页 |
| 3.3.8 系统进化分析 | 第29-32页 |
| 3.3.9 共线性分析 | 第32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-34页 |
| 3.5 小结 | 第34-35页 |
| 4 鸡cathepsin E-A-like基因时空表达谱分析 | 第35-41页 |
| 4.1 试验材料 | 第35页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第35页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第35页 |
| 4.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第35页 |
| 4.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 4.2.1 总RNA提取及其质量检测 | 第35-36页 |
| 4.2.2 反转录及cDNA质量检测 | 第36页 |
| 4.2.3 制备cDNA混池 | 第36页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR引物设计 | 第36页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR反应 | 第36页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第36-37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 4.3.1 cDNA质量检测 | 第37页 |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR引物特异性检测 | 第37页 |
| 4.3.3 鸡cathepsin E-A-like基因在不同组织中的表达规律 | 第37-38页 |
| 4.3.4 鸡cathepsin E-A-like基因在肝脏组织中的时序表达规律 | 第38-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 5 鸡cathepsin E-A-like基因表达调控研究 | 第41-50页 |
| 5.1 试验材料 | 第41-43页 |
| 5.1.1 试验动物 | 第41-42页 |
| 5.1.1.1 个体试验 | 第41页 |
| 5.1.1.2 细胞试验 | 第41-42页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第42页 |
| 5.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第42-43页 |
| 5.2 试验方法 | 第43-44页 |
| 5.2.1 鸡胚肝脏原代细胞的分离及培养 | 第43页 |
| 5.2.2 总RNA提取 | 第43-44页 |
| 5.2.2.1 肝脏组织总RNA提取 | 第43-44页 |
| 5.2.2.2 细胞总RNA提取 | 第44页 |
| 5.2.3 组织和细胞总RNA质量检测 | 第44页 |
| 5.2.4 反转录及cDNA质量检测 | 第44页 |
| 5.2.5 实时荧光定量PCR反应 | 第44页 |
| 5.2.6 数据处理 | 第44页 |
| 5.3 试验结果 | 第44-48页 |
| 5.3.1 鸡胚肝脏原代细胞形态观察 | 第44-45页 |
| 5.3.2 肝脏和细胞cDNA质量及APOB和APOVLDL2引物特异性检测 | 第45-46页 |
| 5.3.3 雌激素处理对鸡肝脏内APOB和APOVLDL2基因表达的影响 | 第46-47页 |
| 5.3.4 雌激素处理对鸡肝脏内cathepsin E-A-like基因表达的影响 | 第47页 |
| 5.3.5 雌激素处理对鸡胚肝脏原代细胞中APOB和APOVLDL2基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 5.3.6 雌激素处理对鸡胚肝脏原代细胞中cathepsin E-A-like基因表达的影响 | 第48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-49页 |
| 5.5 小结 | 第49-50页 |
| 6 雌激素调控鸡cathepsin E-A-like基因表达的机制研究 | 第50-53页 |
| 6.1 试验材料 | 第50页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第50页 |
| 6.1.2 试验仪器 | 第50页 |
| 6.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第50页 |
| 6.2 试验方法 | 第50页 |
| 6.2.1 鸡胚肝脏原代细胞的分离培养 | 第50页 |
| 6.2.2 雌激素拮抗剂处理鸡胚肝脏原代细胞试验设计 | 第50页 |
| 6.2.3 细胞总RNA的提取 | 第50页 |
| 6.2.4 反转录及cDNA质量检测 | 第50页 |
| 6.2.5 实时荧光定量PCR反应 | 第50页 |
| 6.2.6 数据处理 | 第50页 |
| 6.3 试验结果 | 第50-51页 |
| 6.3.1 不同雌激素受体拮抗剂处理对鸡cathepsin E-A-like基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 6.4 讨论 | 第51-52页 |
| 6.5 小结 | 第52-53页 |
| 7 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| ABSTRACT | 第64-65页 |
